| 查看: 1942 | 回复: 18 | |||
| 本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
套叠PCR
|
|||
| 我想把基因内部的一段序列突变掉，采用套叠PCR的方法，两段PCR回收的大小分别为1400bp和200bp左右，但将这两段回收产物混合后作模板进行套叠，却怎么也扩不出目的带，请问是什么原因啊？我是大概按照浓度比1：1混合的，并且也试过不同体积的混合，结果都是一样，片段在250bp稍往上一点 |
回复此楼» 猜你喜欢
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有200人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
-
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点
已经有0人回复
-
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用
已经有0人回复
hyacinth326
金虫 (正式写手)
- 应助: 74 (初中生)
- 金币: 2003.3
- 散金: 304
- 红花: 4
- 帖子: 394
- 在线: 1338.8小时
- 虫号: 1502977
- 注册: 2011-11-21
- 性别: MM
- 专业: 微生物资源与分类学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+3, Good！ 2012-03-29 17:39:09
西瓜: 回帖置顶 2012-03-29 17:49:49
小猫三两只: 金币+3, ★★★很有帮助, 这个方法我试试，谢谢 2012-03-30 16:03:36
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+3, Good！ 2012-03-29 17:39:09
西瓜: 回帖置顶 2012-03-29 17:49:49
小猫三两只: 金币+3, ★★★很有帮助, 这个方法我试试，谢谢 2012-03-30 16:03:36
| 首先，加入的模板量的比例应该是摩尔比为1:1，其次，可以先不加上下游引物而让这两个片段搭到一起的那段为彼此的引物进行10个循环的扩增，然后再加入上下游引物扩增20个循环，如果还没有p出来的话，可以在不加引物的那十个循环里采取两步pcr的方法，我刚做了over lap pcr，2000bp的片段跟1000bp的片段一起搭，就是通过两步pcr做出来的，三步法压根没戏。 |
14楼2012-03-29 11:53:40
imyting
至尊木虫 (正式写手)
- MolEPI: 6
- 应助: 66 (初中生)
- 金币: 10465.7
- 散金: 658
- 红花: 5
- 帖子: 808
- 在线: 168.7小时
- 虫号: 736362
- 注册: 2009-03-31
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2012-03-27 13:12:15
3楼2012-03-27 15:50:13
4楼2012-03-27 18:10:25