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套叠PCR
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| 我想把基因内部的一段序列突变掉，采用套叠PCR的方法，两段PCR回收的大小分别为1400bp和200bp左右，但将这两段回收产物混合后作模板进行套叠，却怎么也扩不出目的带，请问是什么原因啊？我是大概按照浓度比1：1混合的，并且也试过不同体积的混合，结果都是一样，片段在250bp稍往上一点 |
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 【分子生物】EPI帖 |
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hyacinth326
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+3, Good！ 2012-03-29 17:39:09
西瓜: 回帖置顶 2012-03-29 17:49:49
小猫三两只: 金币+3, ★★★很有帮助, 这个方法我试试，谢谢 2012-03-30 16:03:36
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| 首先，加入的模板量的比例应该是摩尔比为1:1，其次，可以先不加上下游引物而让这两个片段搭到一起的那段为彼此的引物进行10个循环的扩增，然后再加入上下游引物扩增20个循环，如果还没有p出来的话，可以在不加引物的那十个循环里采取两步pcr的方法，我刚做了over lap pcr，2000bp的片段跟1000bp的片段一起搭，就是通过两步pcr做出来的，三步法压根没戏。 |
14楼2012-03-29 11:53:40