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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于病毒扩增的问题
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肖颖2009

铁虫 (正式写手)

[求助] 关于病毒扩增的问题

请问病毒感染细胞之前为什么要稀释？稀释之后感染细胞跟不稀释加少量病毒感染细胞之间有什么区别？
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1楼 2012-03-26 20:41:45
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肖颖2009

铁虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by wtyyyyy1988 at 2012-03-26 23:42:40:
你是用293细胞扩增病毒吗？没有规定非要稀释病毒吧，只需要按一定的比例MOI投入到细胞中就行了吧！加入病毒浓度太高才需要稀释下。对于你的问题估计是怕病毒滴度太高，吸取少量有误差，零点几微升的误差就会可能有 ...

朋友，请问怎么计算最佳MOI呢？我是用MDBK细胞扩增的，VSV的具体低度不清楚，这是从我一个在华农读博的师兄那里拿的，他也是找人要的，不是自己做的，所以不清楚具体滴度，只跟我说比较高，大概有10的7次方。但是路途有一个小时左右，装毒的VSV在途中融化了，回去也没有马上扩增。是先放到负140多度的深度冷藏冰箱里，然后做了个预实验有拿出来一次再放回去的。我想毒力应该下降了不少。我准备用8ml的大细胞培养瓶扩增VSV，准备加100微升vsv原液，稀释至1毫升，就是稀释十倍，不知道是否合适，还请多多指教！！！谢谢！
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3楼2012-03-28 14:31:21
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wtyyyyy1988

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhaohq1209: 金币+3, 对滴对滴~我也认为是为了减少误差才需要事先稀释的~我们做细菌也是这样的~ 2012-03-27 07:07:43
肖颖2009: 金币+8, ★★★很有帮助 2012-03-28 14:22:38
你是用293细胞扩增病毒吗？没有规定非要稀释病毒吧，只需要按一定的比例MOI投入到细胞中就行了吧！加入病毒浓度太高才需要稀释下。对于你的问题估计是怕病毒滴度太高，吸取少量有误差，零点几微升的误差就会可能有十的八次方的滴度差距，所以还是稀释的用比较好！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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肖颖2009
我就是我
2楼2012-03-26 23:42:40
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wtyyyyy1988

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
肖颖2009: 金币+2, ★有帮助 2012-04-08 08:42:13
我们这用293扩增病毒是按MOI=10来加的，开始扩增的时候可以用培养瓶来扩，这个是没问题的，纯化后再大量扩增的话就需要十层板了。病毒只要不过多的反复冻融就没多大的问题，对它的活性没有很大的影响，我们这是存在-80冰箱里面。假如你是要摸索病毒对你的目的细胞的转染最佳MOI的话，我们这里是先弄一个GFP到病毒上，然后转染细胞做流式，找到最佳MOI
你是华中农业的？
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我就是我
4楼2012-03-28 15:31:44
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肖颖2009

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wtyyyyy1988 at 2012-03-28 15:31:44:
我们这用293扩增病毒是按MOI=10来加的，开始扩增的时候可以用培养瓶来扩，这个是没问题的，纯化后再大量扩增的话就需要十层板了。病毒只要不过多的反复冻融就没多大的问题，对它的活性没有很大的影响，我们这是存 ...

不是啊  我是湖北大学的   ＶＳＶ是找华农的一个师兄要的　ＶＳＶ是带ＧＦＰ的，但是只有共聚焦显微镜，没有做过细胞流式哦～我后来把病毒原液稀释了１０倍感染的细胞，２４小时后有病变，昨天测的ＴＣＩＤ５０为６.７５.　　　
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5楼2012-04-08 08:45:17
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