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落叶沙沙

金虫 (初入文坛)

[求助] 反相C18柱分离多巴胺,柱子用一段时间后柱压很大,怎么解决

分离多巴胺,使用安捷伦C18柱,流动相是水相:有机相=7:3,水相为NaH2PO4  50mmol/L, EDTA  250mg/L, 十二烷基硫酸钠 500mg/L; 有机相为乙腈 200ml/L, 甲醇 100ml/L. 磷酸调pH2.9, 流速1.0ml/min. 刚开始每次用完用100%甲醇冲洗柱子。柱子使用过一段时间后,柱压变高,已经超过机子最大压力限制,用甲醇冲仍不减小,没有办法使用。现在改用不含SDS的同组分流动相冲洗20倍柱体积,水:甲醇+乙腈=7:3冲20倍柱体积,100%甲醇冲20倍柱体积,但压力仍不减小,怎么办?在网上查过,说用小流速反冲,但是商品柱能反冲吗,有没有影响,冲完还能不能用?求高人指点。
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
每次用完用100%甲醇冲洗柱子——操作有问题,应该先用大比例的水冲洗,以免缓冲盐析出。现在也只能先用90%左右的水冲洗,把盐洗出来了。
守候在风中的宁静。
7楼2012-03-15 21:30:41
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以反冲的,但是时间不能太长,对柱效有一定的影响。不过,我觉得就是反冲也不一定能冲出来了,还是考虑换柱子吧,肯定是以前的缓冲盐没有冲洗干净,越积越多,这些缓冲盐如果当时没有冲干净,以后费再大的力气都难冲下来了。
2楼2012-03-15 18:45:29
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lanpishu23

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你用完直接用100%甲醇冲,肯定很多盐析出来了,堵住柱子了,应该做完样用小流速甲醇:水=1:9冲过夜,出去盐。
没有最好,只有更好
4楼2012-03-15 19:09:02
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落叶沙沙

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lanpishu23 at 2012-03-15 19:09:02:
你用完直接用100%甲醇冲,肯定很多盐析出来了,堵住柱子了,应该做完样用小流速甲醇:水=1:9冲过夜,出去盐。

那现在用小流速甲醇:水=1:9冲过夜,还能把盐冲出来吗?这个柱子还有没有救呀?
5楼2012-03-15 21:08:15
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