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落叶沙沙

金虫 (初入文坛)

[求助] 反相C18柱分离多巴胺，柱子用一段时间后柱压很大，怎么解决

分离多巴胺，使用安捷伦C18柱，流动相是水相：有机相=7:3，水相为NaH2PO4  50mmol/L, EDTA  250mg/L, 十二烷基硫酸钠 500mg/L; 有机相为乙腈 200ml/L, 甲醇 100ml/L. 磷酸调pH2.9, 流速1.0ml/min. 刚开始每次用完用100%甲醇冲洗柱子。柱子使用过一段时间后，柱压变高，已经超过机子最大压力限制，用甲醇冲仍不减小，没有办法使用。现在改用不含SDS的同组分流动相冲洗20倍柱体积，水：甲醇+乙腈=7:3冲20倍柱体积，100%甲醇冲20倍柱体积，但压力仍不减小，怎么办？在网上查过，说用小流速反冲，但是商品柱能反冲吗，有没有影响，冲完还能不能用？求高人指点。
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1楼 2012-03-15 17:32:37
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lanpishu23

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你用完直接用100%甲醇冲，肯定很多盐析出来了，堵住柱子了，应该做完样用小流速甲醇：水=1:9冲过夜，出去盐。
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没有最好，只有更好
4楼2012-03-15 19:09:02
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以反冲的，但是时间不能太长，对柱效有一定的影响。不过，我觉得就是反冲也不一定能冲出来了，还是考虑换柱子吧，肯定是以前的缓冲盐没有冲洗干净，越积越多，这些缓冲盐如果当时没有冲干净，以后费再大的力气都难冲下来了。
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2楼2012-03-15 18:45:29
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落叶沙沙

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lanpishu23 at 2012-03-15 19:09:02:
你用完直接用100%甲醇冲，肯定很多盐析出来了，堵住柱子了，应该做完样用小流速甲醇：水=1:9冲过夜，出去盐。

那现在用小流速甲醇：水=1:9冲过夜，还能把盐冲出来吗？这个柱子还有没有救呀？
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5楼2012-03-15 21:08:15
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落叶沙沙

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lihuan0525 at 2012-03-15 18:45:29:
可以反冲的，但是时间不能太长，对柱效有一定的影响。不过，我觉得就是反冲也不一定能冲出来了，还是考虑换柱子吧，肯定是以前的缓冲盐没有冲洗干净，越积越多，这些缓冲盐如果当时没有冲干净，以后费再大的力气都 ...

那怎么办呀，现在如果用甲醇+水冲过夜，缓冲盐能冲掉么，这跟柱子是不是就报废了呀？
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6楼2012-03-15 21:10:03
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