| 查看: 1810 | 回复: 5 | |||
[求助]
求助蛋白纯化的高手
|
| 我现在真核表达一个蛋白，蛋白分泌到培养基的上清中，准备用DMEM培养，2%FBS.目的蛋白的分子量是22KD，等电点是9.2，有没有高手能帮我设计一个纯化的步骤呀！该蛋白没有标签，想直接用亲和层析，用该蛋白的抗体制备能行吗？ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有298人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助高手，我用手提的土壤DNA，用什么方法纯化
已经有11人回复
- 【求助/交流】请过来人推荐用于异源表达的蛋白His-tag纯化的试剂盒
已经有3人回复
- 【求助/交流】求助蛋白纯化系统
已经有8人回复
- 【求助/交流】蛋白纯化
已经有4人回复
- 【求助/交流】蛋白纯化柱子
已经有16人回复
- 【求助/交流】关于蛋白纯化
已经有30人回复
- 【求助/交流】蛋白纯化
已经有3人回复
- 【求助/交流】求助蛋白纯化问题
已经有17人回复
- 【求助/交流】蛋白纯化
已经有3人回复
疯狂修行者
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 7
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 3121.2
- 散金: 753
- 红花: 8
- 帖子: 721
- 在线: 111.2小时
- 虫号: 332393
- 注册: 2007-03-26
- 性别: GG
- 专业: 农业昆虫学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+3): Good！ 2012-03-14 22:20:55
yuanalice: 金币+15, ★★★很有帮助 2012-03-15 10:48:05
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+3): Good！ 2012-03-14 22:20:55
yuanalice: 金币+15, ★★★很有帮助 2012-03-15 10:48:05
|
（1）加入NaOH溶液调pH值到9-10 （2）4度8000转离心约10分钟，取上清： （3）按照1比7的比例加入4M NaAc溶液，利用HAc调pH值至4.5-5.0 4M NaAc溶液： 分子量 质量 总体积 4M NaAc 82.07 65.61g 200mL （用HAc调pH值至4.5，先用少量的水（约50mL）溶解NaAc,然后加入HAc至pH5.3左右，稀释10测定pH值（取0.5mL溶液加水稀释至5mL测定pH值，）用HAc调节原NaAc溶液使得稀释10后的溶液pH值至4.5） （4）4℃下，沉淀6-8h （沉淀时间可以根据实验安排适当调整至更长，不可低于6h） （5）4℃下，12000rpm离心15min，收集沉淀 （6）用预冷无菌水洗涤沉淀2次，4℃下，12000rpm离心15min （7）沉淀溶于50 mM的Na2CO3溶解，1M NaOH调节pH值至9.5-10.0 （注意: 加入体积为1L菌液溶于10mL Na2CO3溶液。若晶体蛋白降解可加入150 mM的PMSF）。 |
2楼2012-03-14 20:07:59
lihuan0525
金虫 (职业作家)
- 应助: 565 (博士)
- 金币: 2145
- 散金: 687
- 红花: 15
- 帖子: 3299
- 在线: 551.8小时
- 虫号: 1292024
- 注册: 2011-05-11
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
3楼2012-03-14 22:48:41
4楼2012-03-15 10:47:54
5楼2012-03-15 10:48:54
SPMMP
银虫 (正式写手)
- 应助: 21 (小学生)
- 金币: 6671.1
- 帖子: 518
- 在线: 118.6小时
- 虫号: 1388241
- 注册: 2011-09-03
- 性别: GG
- 专业: 食品科学基础
6楼2012-03-27 22:07:07
