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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 紫外-分光光度法测定含量时，有必要每次都做标准曲线吗
汕头大学海洋科学接受调剂
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yilishanshan

木虫 (正式写手)

[交流] 紫外-分光光度法测定含量时，有必要每次都做标准曲线吗

分光光度法测定含量时，有必要每次都做标准曲线吗
前几天做的标准曲线，再拿来用不行吗？
既然都有了个线性范围，后来做出的吸光度值，只要在范围内，为何不能根据之前的标曲读出浓度值呢!
每做一次试验，随行做一个标准，感觉有点浪费对照哦
想不通呀，请高手赐教，万分感激！


我做的是总黄酮，好像不太稳定！
但对照品、样品都需要显色，最后反应时间是15~20min，一次差不多要处理十几个，从第一个开始测，到最后一个时间早过了最佳反应时间。
能否先显色测定标曲的5个点和5个样品，仪器不关，再去显色处理剩下的10个样品，再测定！后面的10个样品用之前的标曲？

[ Last edited by yilishanshan on 2012-3-14 at 23:11 ]
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1楼 2012-03-13 21:38:37
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

鸭绿江畔

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5): 给个红包，谢谢回帖
中药2000(金币+2): 谢谢交流。 2012-03-14 11:40:01
标曲必须每次都得做。因为仪器自身的性能会影响到标曲的。这个你做个实验就看出来了。
当然了，如果你就想凑合着用以前的标曲也行，那得看你样品的稳定性之类的因素。碰上在溶液中放一年也不变化的，还行。碰上生物样品的话，你还在是每次做含量测定前，老老实实的做一下标曲。
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3楼2012-03-14 09:21:35
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泡泡-211

至尊木虫 (知名作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5): 给个红包，谢谢回帖
中药2000(金币+1): 谢谢交流。 2012-03-14 11:39:29
如果你对你所建立的含量测定方法进行过方法学验证，并满足要求，就可以不用每次都做标曲，直接用就可以了
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2楼2012-03-13 22:07:08
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bourne47

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5): 给个红包，谢谢回帖
leecius: 金币+1, 谢谢参与。 2012-03-16 08:49:28
你能保证比色皿不被着色？
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4楼2012-03-14 11:10:06
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line333

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
leecius: 金币+1, 谢谢参与。 2012-03-16 08:50:45
样品太多，显色后待测定时间已过了最佳时间！针对这个，其实可以把实验样品显色的时间错开来，让每个样品的显色放置的时间较为接近，没人说要一次性让几十个样一起显色！

若不想做标曲，可以取样同深度的标液测定，若吸光度无明显变化，则可用原标曲；若偏移值较大，需重做！
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15楼2012-03-16 08:39:45
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992357635

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我们每次都要做的，因为紫外毕竟不是那么稳定
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18楼2012-03-20 17:38:43
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普通回帖

0401佳

金虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫(金币+0.5): 给个红包，谢谢回帖
leecius: 金币+1, 谢谢参与。 2012-03-16 08:49:33
考虑各种因素都可能影响，应该重新做的
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5楼2012-03-14 14:26:49
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liuleitcm

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5): 给个红包，谢谢回帖
leecius: 金币+1, 谢谢参与。 2012-03-16 08:49:39
紫外仪器应该不是很稳定的哦，每次测数值都不一样
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6楼2012-03-14 14:50:59
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ly_tryh

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5): 给个红包，谢谢回帖
leecius: 金币+1, 谢谢参与。 2012-03-16 08:49:45
不了解，但是不可以做一个两点的随行吗？不做五个点的。
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7楼2012-03-14 15:32:10
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anran_1224

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5): 给个红包，谢谢回帖
leecius: 金币+1, 谢谢参与。 2012-03-16 08:49:51
配制一个跟你测的浓度近似的一个标准溶液，采用外标一点法就可以吧
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8楼2012-03-14 16:14:34
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panshi3000

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5): 给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
leecius: 金币+1, 谢谢。 2012-03-16 08:49:57
定量测定的话，有一种叫做外标法.包括外标一点、外标两点、标准曲线法等。每次用外标一点或两点法就行了
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9楼2012-03-14 17:06:36
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默默love

铜虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5): 给个红包，谢谢回帖
leecius: 金币+1, 谢谢参与。 2012-03-16 08:50:02
药物不稳定的话不能再用的。
如果非常稳定的话应该是可以的。
不过为了平行，标曲应该是和样品一起处理的才对
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10楼2012-03-14 17:26:25
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yijing-gu

铁杆木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5): 给个红包，谢谢回帖
leecius: 金币+1, 谢谢参与。 2012-03-16 08:50:11
只看吸收光谱没有必要每次标定吧。
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11楼2012-03-14 19:11:00
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xuyan040506

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
leecius: 金币+2, 谢谢帮助。 2012-03-16 08:50:25
如果检测样品的稳定性好,并做过检测方法的方法学验证,以前做的标准曲线应该可以重复使用.
如果样品的稳定性不好,以前做的标准曲线不能重复使用,只能每次随检测来重新标定.
但是这样的话,这个检测方法就有问题了,如果每次检测都需要同时标定标准曲线,这个检测方法就没什么实用价值了.
真的没有其他的检测方法了吗?
我对楼主的检测不了解,但觉得最好还是找一个稳定可靠的检测方法.
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12楼2012-03-15 13:13:04
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kedaxiaoyu

木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
leecius: 金币+1, 谢谢参与。 2012-03-16 08:50:32
要求结果准确性的话，可以保证每周做一次标曲。
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13楼2012-03-15 15:44:48
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yll120166

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
leecius: 金币+1, 谢谢参与。 2012-03-16 08:50:40
连续几天分别做标线，如果差别不大就不用每天做了，如果样品稳定性不好，首先要解决稳定性的问题，样品不稳定，每天随行标线也难测准。
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14楼2012-03-15 16:07:32
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shmhqh

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
严格说应做，不过可像楼上所说，做一外标，校正一下。
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16楼2012-03-16 10:13:05
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lhy07312003

金虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
当然要做的啊，就跟我们用别的方法测定时用对照品一样，标准曲线就相当于对照品咯。
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17楼2012-03-16 16:08:46
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xxwanhhp

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
karl2100: 金币+1, 谢谢回复！ 2012-04-12 00:26:17
应该是每做一次样品时做一条标线，因为每次开机后标线有时候不一样，有误差
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19楼2012-03-23 21:02:48
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yilishanshan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by anran_1224 at 2012-03-14 16:14:34:
配制一个跟你测的浓度近似的一个标准溶液，采用外标一点法就可以吧

困惑
配制了一个与之前做的标曲第三点一样浓度的标准溶液，但吸光度值相差了0.1，怎么校正标曲呀？
外标一点法怎么做呢？只有一个点的数据，没有线性方程，根据样品吸光度值，怎么计算其浓度？
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20楼2012-04-12 00:00:54
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yilishanshan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by panshi3000 at 2012-03-14 17:06:36:
定量测定的话，有一种叫做外标法.包括外标一点、外标两点、标准曲线法等。每次用外标一点或两点法就行了

外标两点法如何计算？
做了两个点，怎么计算呢？ 是用两个点做标曲吗？
老师说好像需要一个方程，但不知道是什么？
上网查了，大多是介绍高液-蒸发光散射检测的，没有紫外分光光度法！

做标曲是不是有三个点就能构建？
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21楼2012-04-12 00:08:20
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Tio-Dom

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
要每次都做，隔的时间长了，很多条件都会发生变化，我刚刚做了一个对乙酰氨基酚的标准曲线，与一年前还是有较明显的不同

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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22楼2012-04-12 08:54:56
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yugijiang

木虫 (著名写手)
你可以做完样品后再测下标准样，如果重现性还是很好的话就木问题
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23楼2012-07-06 20:44:13
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guoqiang5721

新虫 (初入文坛)
做紫外时间要把握好吧
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24楼2012-07-09 12:35:55
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abcdwenwen

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
karl2100: 金币+1, 谢谢！ 2012-08-01 10:10:40
如果是要求很严格，做仲裁或发盖章的结果，那是必须每次都做标准曲线的。如果要求不高，可以不用每次都做，但可以每次带跟样品浓度相近的标样1-2个。带标样的目的就是检测这次的实验操作能否采用之前的工作曲线计算。如果之前的工作曲线连标样都计算不准，请问你的样品是如何能够用之前的工作曲线计算。如果楼主一次测定的样品很多，一般要在样品中间适当的插入标样。之所以这样做，就是为了保证你方法测定的准确度。
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25楼2012-08-01 09:17:24
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白加黑

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不需要啊，分子光谱比较稳定，一般来说只要你的显色剂和缓冲溶液之类没有换，一般一个月都不用重做。记得教科书上说，如果怕设备漂移，可以做个单点校正，定期配一个溶液，测一下，把原来的曲线平移一下就好了。
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26楼2013-10-19 15:39:40
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古岭雪屋

新虫 (小有名气)
做一下比较好
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27楼2015-01-12 23:09:15
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zh_yian

新虫 (初入文坛)
认同26楼的观点
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28楼2015-12-31 16:44:43
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97057006

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
严格来说肯定要做的，像紫外这种仪器并不那么稳定的

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29楼2016-01-01 10:08:20
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flora_5

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
外标法不用。
标准曲线法需要。
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30楼2016-01-02 17:09:28
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匿名

用户注销 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖仅楼主可见
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31楼2016-02-24 20:38:37
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