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N-末端 氨基酸测序——转膜问题
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各位虫友： 小虫用SDS-PAGE识别到一个分子量110kDa左右（0.75mm）胶，只是想知道N-末端20个氨基酸顺序，不需要保持其活性，之后送到测序公司进行氨基酸识别。已经在网上和自己实践后进行了转膜实验，效果不是很理想。想和虫友共同探讨和完善转膜方案，以便后续试验顺利进行： 我用PVDF膜进行转膜，然后准备进行N-端氨基酸测序. 1. SDS-PAGE是还原电泳，用考马斯蓝染色条带清晰。 1. PVDF膜放在甲醇里漂洗，去除膜中气泡，便于蛋白转移。 3. 转膜缓冲液用CAPS pH11。 2. 制作三明治。用60V或100v电压转了一个小时，染色用立春红S几分钟。 可能细节还有问题，期望虫友和有经验的老师提供建议，提供详细方案和建议。之后再进行整理，以便实验顺利进行！ |
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7楼2012-07-22 14:38:21