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lizhijiang

木虫 (著名写手)


[交流] N-末端 氨基酸测序——转膜问题

各位虫友:
    小虫用SDS-PAGE识别到一个分子量110kDa左右(0.75mm)胶,只是想知道N-末端20个氨基酸顺序,不需要保持其活性,之后送到测序公司进行氨基酸识别。已经在网上和自己实践后进行了转膜实验,效果不是很理想。想和虫友共同探讨和完善转膜方案,以便后续试验顺利进行:
    我用PVDF膜进行转膜,然后准备进行N-端氨基酸测序.
1. SDS-PAGE是还原电泳,用考马斯蓝染色条带清晰。
1. PVDF膜放在甲醇里漂洗,去除膜中气泡,便于蛋白转移。
3. 转膜缓冲液用CAPS pH11。
2. 制作三明治。用60V或100v电压转了一个小时,染色用立春红S几分钟。
  可能细节还有问题,期望虫友和有经验的老师提供建议,提供详细方案和建议。之后再进行整理,以便实验顺利进行!
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可以寄出去让公司转膜测序吗?卡在一步上很浪费时间的。
7楼2012-07-22 14:38:21
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