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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » N-末端 氨基酸测序——转膜问题
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lizhijiang

木虫 (著名写手)

[交流] N-末端 氨基酸测序——转膜问题

各位虫友：
    小虫用SDS-PAGE识别到一个分子量110kDa左右（0.75mm）胶，只是想知道N-末端20个氨基酸顺序，不需要保持其活性，之后送到测序公司进行氨基酸识别。已经在网上和自己实践后进行了转膜实验，效果不是很理想。想和虫友共同探讨和完善转膜方案，以便后续试验顺利进行：
    我用PVDF膜进行转膜，然后准备进行N-端氨基酸测序.
1. SDS-PAGE是还原电泳，用考马斯蓝染色条带清晰。
1. PVDF膜放在甲醇里漂洗，去除膜中气泡，便于蛋白转移。
3. 转膜缓冲液用CAPS pH11。
2. 制作三明治。用60V或100v电压转了一个小时，染色用立春红S几分钟。
  可能细节还有问题，期望虫友和有经验的老师提供建议，提供详细方案和建议。之后再进行整理，以便实验顺利进行！
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1楼 2012-03-12 19:49:57
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以寄出去让公司转膜测序吗？卡在一步上很浪费时间的。
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7楼2012-07-22 14:38:21
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