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maomao1426

木虫 (著名写手)

[求助] 放线菌液体培养基

想要获得大量放线菌细胞,请问用什么培养基较好?

附:现在我用的高氏一号液培,长得不好。
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张香玲1017

铁杆木虫 (著名写手)

冷夜雨

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针对不同类型的放线菌,要用不同的培养基,高氏一号只是其中简单的一种,建议您再把培养基做一下优化,或查看相关文献再进行改进。
希望大家多多交流。
2楼2012-03-08 09:33:25
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zys1256

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
配方很多,都去试的话太麻烦,建议自己摸索。一般情况下,液体培养基的使用浓度比固体的高,因为生长量大,消耗多,另外多使用能够快速利用的氮碳源,不如胰蛋白胨,牛肉膏,葡萄糖等等物质,另外注意培养温度、pH、和培养时间,
10楼2012-03-09 11:04:59
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普通回帖

lgs1

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不知道你的放线菌是不是链霉菌,我一般用的液体和固体培养基是ISP1和ISP2,具体配方
ISP1:胰酪蛋白胨   5.0g/l
        酵母浸粉      3.0g/l
ISP2:酵母浸粉     4.0g/l
         麦芽浸粉     10.0g/l
        葡萄糖        4.0g/l
         琼脂         20.0g/l
3楼2012-03-08 10:12:42
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yanglong0321

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
放线菌要对培养基进行优化才能长得比较好。除了高氏一号培养基配方中的无机盐及微量元素不变外,一般要调节碳源和氮源,碳源除了加可溶性淀粉外,还可以适当添加葡萄糖,氮源除了无机氮源外,还要适当添加有机氮源,之前做实验用的是安琪公司的有机氮源酵母浸粉,通过这些优化,效果比原始的高氏一号培养基菌体长得很好。
4楼2012-03-08 10:26:30
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mada1986

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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maomao1426: 金币+3, 有帮助 2012-06-20 09:40:46
我这有几个培养基你可以试试看 给你附在下面了 祝实验顺利

MS琼脂培养基(g/L)
甘露醇        20         黄豆粉        20
琼脂粉        20        pH        自然
先将甘露醇溶解于适量水中,再加入到含有相应量琼脂和黄豆粉的三角瓶内,115℃,15min灭菌2次,两次之间振荡瓶子。
微量元素溶液(10×)(mg/100 ml):
ZnCl2        40        Na2B4O7•10H2O        10
FeCl3•6H2O        200        (NH4)6Mo7O24•4H2O        10
CuCl2•2H2O        10        MnCl2•4H2O        10

高氏1号(G 1)培养基(g/L):
可溶性淀粉        20        NaCl        0.5
K2HPO4        0.5        KNO3        1.0
MgSO4•7H2O        0.5        FeSO4        0.01
纯化琼脂粉        20        pH        7.4

R2YE培养基(g / L):
蔗糖        103        K2SO4        0.25
MgCl2•6H2O        10.12        葡萄糖        10
Difco酪蛋白氨基酸        0.1        TES        5.73
微量元素溶液(10×)        2 ml        酵母抽提物        5
称取2.02克纯化琼脂放入250 ml三角瓶中,倒入80 ml上述溶液,塞上棉塞后高压灭菌。使用时,将培养基融化,然后在每瓶中加入以下灭菌溶液:
KH2PO4(0.5%)        1 ml        NaOH(1mol/L)        0.7 ml
CaCl2(5 mol/L)        0.4 ml               
软琼脂培养基:同R2YE培养基,但琼脂粉含量为0.6%。

酵母、麦芽抽提物、葡萄糖(YMB)培养基(g/L):
酵母抽提物        4        葡萄糖        4
麦芽抽提物        10        微量元素溶液(10×)        200ml
pH        7.2               
YMA培养基:在YMB培养基中加入纯化琼脂2 %
YMA软琼脂培养基:在YMB培养基中加入纯化琼脂0.6 %
YEME液体培养基(g /L):
酵母抽提物        3        Polypepton        5
麦芽抽提物        3        葡萄糖        10
蔗糖        250        pH        自然

产孢培养基YMS(g/L)
酵母抽提物        1.5        可溶性淀粉        10.0
KNO3        1.0        琼脂粉        16
pH        7.2               

P(原生质体制备)缓冲液(g/L)
蔗糖        103        K2SO4        0.25
MgCl2•6H2O        2.02        微量元素溶液        2 ml
先加水定容至800ml,分装成80 ml的等分样品,然后高压灭菌。
使用前,每瓶加入以下无菌组分:
KH2PO4(0.5%)        1 ml        TES(5.73%,pH 6.5)        10 ml
CaCl2•2H2O(3.68%)        10 ml               
液体培养的时候 不要加琼脂就行了
5楼2012-03-08 12:13:47
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xiaojiancai

木虫 (著名写手)

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放线菌种类太多,你可以再试试下面几种:       
S培养基:葡萄糖1%,酵母膏0.4%,蛋白胨0.4%,K2HPO4 0.4%,KH2PO4 0.2%,MgSO4•7H2O 0.05%,水100mL。
改良黄豆粉培养基:淀粉0.5%,酵母膏0.2%,蔗糖1%,NaCl 0.2%,蛋白胨0.2%,K2HPO4 0.05%,MgSO4•7H2O葡萄糖1% 0.05%,CaCO30.1%,2%的黄豆粉浸汁100 mL。
小米培养基:葡萄糖1%,蛋白胨0.3% ,NaCl 0.25%,CaCO30.02%,1%的小米浸汁100 mL。
知福福常在,随缘缘自来!
6楼2012-03-08 16:35:22
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maomao1426

木虫 (著名写手)

好的,谢谢大家!
7楼2012-03-09 08:55:58
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zhen_fang

银虫 (正式写手)

wowuyule
8楼2012-03-09 09:29:00
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feierorange

铜虫 (小有名气)

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ISP2:酵母浸粉     4.0g/l
          麦芽浸粉     10.0g/l
         葡萄糖        4.0g/l
          琼脂         20.0g/l
这个一般放线菌都长得比较好。
9楼2012-03-09 10:52:18
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