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luocongqiang

铁虫 (小有名气)

[求助] PCR-DGGE技术寻求

本人要做PCR-DGGE，由于从没有接触过这方面的知识，从提取DNA到最后完成，有哪些步骤需要根据自己的实验去摸索，哪些东西是通用的，我要做的事肠道微生物，希望有经验的给与帮助，本人无限感激
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1楼2012-03-03 16:29:49
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
您是哪里的？ＤＧＧＥ做的人挺多的。
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2楼2012-03-17 21:28:26
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luocongqiang

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hihoney at 2012-03-17 21:28:26:
您是哪里的？ＤＧＧＥ做的人挺多的。

恩 是挺多的 我水生所的 你做这个吗
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3楼2012-03-18 00:27:00
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DGGE

新虫 (初入文坛)
★ ★
rainwander: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-02 07:27:08
引用回帖:
3楼: Originally posted by luocongqiang at 2012-03-18 00:27:00:
恩 是挺多的 我水生所的 你做这个吗

如果做细菌真菌的，所有的东西都是现成的可以参考的。只是你的菌群种类不同，胶的变性梯度可能需要稍微调整下。
如果做16S或Its，18S的话，引物什么的都是通用引物，很多文献都能找到，不用自己设计。

如果是其他基因可能就需要你自己设计了。
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4楼2012-04-01 10:29:51
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gospeed

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-02 07:27:16
luocongqiang: 金币+4 2012-04-04 18:18:55
肠道和土壤这两种样品最需要注意的就是提取出来DNA的纯度，建议用mobio的powersoil或者qiagene的粪便专用试剂盒。只要提出来的dna够好，扩的够好，后面不会有问题的
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5楼2012-04-01 14:32:48
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luocongqiang

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by gospeed at 2012-04-01 14:32:48:
肠道和土壤这两种样品最需要注意的就是提取出来DNA的纯度，建议用mobio的powersoil或者qiagene的粪便专用试剂盒。只要提出来的dna够好，扩的够好，后面不会有问题的

谢谢啊 请问下omega粪便试剂盒怎么样啊
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6楼2012-04-01 14:53:08
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gospeed

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by luocongqiang at 2012-04-01 14:53:08:
谢谢啊 请问下omega粪便试剂盒怎么样啊

omega没用过，mobio和qiagen的提出来很干净就是了~o记的试剂盒好像比较便宜，也可以试试。qiagen的最好，毫无疑问
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7楼2012-04-02 00:53:02
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DGGE

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by DGGE at 2012-04-01 10:29:51:
如果做细菌真菌的，所有的东西都是现成的可以参考的。只是你的菌群种类不同，胶的变性梯度可能需要稍微调整下。
如果做16S或Its，18S的话，引物什么的都是通用引物，很多文献都能找到，不用自己设计。

如果是 ...

是的。做这方面的。
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8楼2012-04-09 14:04:39
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爱睡猪

金虫 (正式写手)
提出DNA了 PCR没事 DGGE就不会有问题了~~你是谢平老师的学生么 ？
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ControlMyself
9楼2012-12-15 12:56:07
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caiyu112233

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by DGGE at 2012-04-01 10:29:51
如果做细菌真菌的，所有的东西都是现成的可以参考的。只是你的菌群种类不同，胶的变性梯度可能需要稍微调整下。
如果做16S或Its，18S的话，引物什么的都是通用引物，很多文献都能找到，不用自己设计。

如果是其 ...

您好，可不可以帮忙提供下可以参考的现成步骤。
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10楼2013-04-10 23:24:42
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