[交流] 连接转化

楼: Originally posted by joan198108 at 2012-02-26 13:37:47:
是不是你的基因表达蛋白对感受态细胞来说是一种毒蛋白啊

楼: Originally posted by liuyu_sdili at 2012-02-26 14:07:19:
首先，你挑的菌空质粒能提出来吗？
如果空载体转进去的都很少，那说明可能是感受态或者是连接有问题~~~
楼上说蛋白有毒性，个人并不赞同，因为pETz做表达应该用BL21才对，不是用DH5a，楼主显然只是想让质粒在DH ...

7楼: Originally posted by li-spring at 2012-02-26 21:29:28:
有两个提出来了，但条带大小不对，感觉是空载体，还有 转化的菌一般过夜就长出来，我这个足足长了两天，而且菌斑很小，不晓得是什么原因，挑了12个菌，最后只有两个长出来了，质粒提了之后条带不对

8楼: Originally posted by 天使托 at 2012-02-26 21:34:46:
一般情况下，单克隆如果没有问题，就要考虑你连接的问题了‘
1：质粒和目的片段是否酶切的干净，并且保证是否纯化干净？
2：连接体系合适与否？当然了。。。这要取决于你载体的大小和基因的大小了
祝好运！