24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1483  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

li-spring

兑换贵宾

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


[交流] 连接转化

本人用Pet30质粒作载体,选择Nco1、BamH1作双酶切,然后连接1000bp左右的基因片段,转化DH5a菌,前后做了六次了,要么平板上就不长菌,要么就长的很慢,48小时后才出现很小的菌落,第三次挑了12个菌,到液体LB里面也足足长了48小时才出来,提了质粒后发现目的片段几乎没有,请教各位大虾怎么办? 感受态是买的新的
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

考研生涯

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!



li-spring(金币+1):谢谢参与
质粒提出来后跑胶,由于是超螺旋可能无法判断目的基因是否插入,你可以做个菌落PcR,或者将提的质粒 单酶切以后再看看.
10楼2012-02-27 09:44:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

joan198108

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!



li-spring(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+1): 希望不是 2012-02-26 19:34:13
是不是你的基因表达蛋白对感受态细胞来说是一种毒蛋白啊
2楼2012-02-26 13:37:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuyu_sdili

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!



li-spring(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+2): 学习下 2012-02-26 19:34:42
li-spring(金币+2): 转化的菌生长速度超慢,要足足两天才能长起来是怎么回事啊 2012-02-26 21:30:23
首先,你挑的菌空质粒能提出来吗?
如果空载体转进去的都很少,那说明可能是感受态或者是连接有问题~~~
楼上说蛋白有毒性,个人并不赞同,因为pETz做表达应该用BL21才对,不是用DH5a,楼主显然只是想让质粒在DH5a菌里面保存,并不是做表达~~~
3楼2012-02-26 14:07:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青菜小虫

超级版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!



li-spring(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+1): 有道理 2012-02-26 19:34:57
借一个感受态做个对照实验,新买的也不一定是好用的。
4楼2012-02-26 15:08:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿085600中科院宁波所276分求调剂 +15 材料学257求调剂 2026-03-28 16/800 2026-03-31 22:51 by wwytracy
[考研] 一志愿:西北大学,英一数一408-284分求调剂 +7 12.27 2026-03-27 7/350 2026-03-31 21:59 by lbsjt
[考研] 08工科275分求调剂 +6 AaAa7420 2026-03-31 6/300 2026-03-31 21:27 by XBbbb13
[考研] 352分-085602-一志愿985 +6 海纳百川Ly 2026-03-29 6/300 2026-03-31 21:06 by yuq
[考研] 294分080500材料科学与工程求调剂 +11 柳溪边 2026-03-26 12/600 2026-03-31 19:53 by Dyhoer
[考研] 285求调剂 +3 FZAC123 2026-03-30 3/150 2026-03-31 17:49 by 热情沙漠
[考研] 085601 材料工程 313分 求调剂 +6 Ong3 2026-03-27 6/300 2026-03-31 15:18 by yanflower7133
[考研] 354求调剂 +3 lxb598 2026-03-31 4/200 2026-03-31 13:42 by sophie2180
[考研] 272求调剂,接受跨专业调剂! +3 闲鱼卢 2026-03-31 3/150 2026-03-31 13:00 by 替代品000
[考研] 求调剂 +4 研s. 2026-03-25 4/200 2026-03-31 10:05 by fmesaito
[考研] 22408 359分调剂 +4 Qshers 2026-03-27 8/400 2026-03-31 08:53 by Qshers
[考研] 297 地理学070500 复试求调剂 +3 小圆圈圈ooo 2026-03-30 3/150 2026-03-30 21:05 by 余震yz
[考研] 279求调剂 +12 j的立方 2026-03-29 12/600 2026-03-30 20:30 by dick_runner
[考研] 0703一志愿9,初试成绩:338,四六级已过,有科研经历,求调剂! +7 Zuhui0306 2026-03-25 7/350 2026-03-30 19:01 by 源_2020
[考研] 085602 化学工程专硕 340分求调剂 +4 qianbai11 2026-03-29 4/200 2026-03-30 11:34 by 唐沐儿
[考研] 275求调剂 +15 Micky11223 2026-03-25 20/1000 2026-03-29 20:44 by 唐沐儿
[考研] 总分293求调剂 +8 加一一九 2026-03-25 11/550 2026-03-29 19:53 by 无际的草原
[考研] 316求调剂 +7 江辞666 2026-03-26 7/350 2026-03-28 21:28 by sanrepian
[考研] 265求调剂 +8 小木虫085600 2026-03-27 8/400 2026-03-27 22:16 by 无际的草原
[考研] 285求调剂 +4 AZMK 2026-03-27 7/350 2026-03-27 20:59 by AZMK
信息提示
请填处理意见