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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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li-spring

木虫 (著名写手)


[交流] 连接转化

本人用Pet30质粒作载体,选择Nco1、BamH1作双酶切,然后连接1000bp左右的基因片段,转化DH5a菌,前后做了六次了,要么平板上就不长菌,要么就长的很慢,48小时后才出现很小的菌落,第三次挑了12个菌,到液体LB里面也足足长了48小时才出来,提了质粒后发现目的片段几乎没有,请教各位大虾怎么办? 感受态是买的新的
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liuyu_sdili

木虫 (正式写手)


引用回帖:
7楼: Originally posted by li-spring at 2012-02-26 21:29:28:
有两个提出来了,但条带大小不对,感觉是空载体,还有 转化的菌一般过夜就长出来,我这个足足长了两天,而且菌斑很小,不晓得是什么原因,挑了12个菌,最后只有两个长出来了,质粒提了之后条带不对

这个搞得我也有点晕。。。。。。
9楼2012-02-27 07:56:23
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)



li-spring(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+1): 希望不是 2012-02-26 19:34:13
是不是你的基因表达蛋白对感受态细胞来说是一种毒蛋白啊
2楼2012-02-26 13:37:47
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liuyu_sdili

木虫 (正式写手)



li-spring(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+2): 学习下 2012-02-26 19:34:42
li-spring(金币+2): 转化的菌生长速度超慢,要足足两天才能长起来是怎么回事啊 2012-02-26 21:30:23
首先,你挑的菌空质粒能提出来吗?
如果空载体转进去的都很少,那说明可能是感受态或者是连接有问题~~~
楼上说蛋白有毒性,个人并不赞同,因为pETz做表达应该用BL21才对,不是用DH5a,楼主显然只是想让质粒在DH5a菌里面保存,并不是做表达~~~
3楼2012-02-26 14:07:19
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青菜小虫

银虫 (著名写手)



li-spring(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+1): 有道理 2012-02-26 19:34:57
借一个感受态做个对照实验,新买的也不一定是好用的。
4楼2012-02-26 15:08:25
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