应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR引物的量如何确定，求助高手指教
南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
52/1返回列表
查看: 3839  |  回复: 11
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

13808906306

金虫 (正式写手)

[求助] PCR引物的量如何确定，求助高手指教已有1人参与

最近做PCR发现一个问题，一些资料上说PCR体系中引物的量要稍大于模板的量，可是在PCR过程中引物不断被消耗，我计算了下十几二十几个循环后引物明显不够啊，比如我做的PCR  50ul 体系：引物1、2各为25 pmol ，模板量4 pmol ，我的是倍数扩增，按我的做法不到四个循，引物环就消耗干净了。可是我在实际操作中发现，PCR在第二十五、六个循环才出条带，这是为什么啊。求高人指点
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼2012-02-23 15:37:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

13808906306

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 海阔天空8158 at 2012-02-24 08:26:25:
这个问题与算法无关。
楼主，你的算法可能没错，但是，你忽略一个重要问题：你的DNA都是你的目的产物吗？肯定有许多其他无关序列的。
因此，计算没有丝毫意义。这也是平常做PCR的时候根本不会计算的原因。

即 ...

能不能跟我说说这个PCR加的引物量是稍多于起始模板量，还是稍多于PCR之后的目的DNA量？
赞一下 回复此楼
11楼2012-02-24 15:37:11
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

13808906306

金虫 (正式写手)
坐等高人指点
回复此楼
2楼2012-02-23 15:40:46
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
模板量4 pmol 这个说法你是不是误解了？
假设模板为400bp的DNA片段1ng/ul，使用1ul作模板。在100ul体系中，
则模板量为0.01ng/ul换算出来即为0.037nM(而1nM=0.001pmol/ul，0.037nM=0.000037pmol/ul)
而引物为10pmol/ul使用1ul加到100的体系里也有0.1pmol/ul>>0.000037pmol/ul
赞一下 回复此楼
伟大航线....
3楼2012-02-23 16:36:33
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

13808906306

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by longrna at 2012-02-23 16:36:33:
模板量4 pmol 这个说法你是不是误解了？
假设模板为400bp的DNA片段1ng/ul，使用1ul作模板。在100ul体系中，
则模板量为0.01ng/ul换算出来即为0.037nM(而1nM=0.001pmol/ul，0.037nM=0.000037pmol/ul)
而引物为1 ...

木有误解啊，我是用紫外分光光度计测的浓度：14ug/ml ，片段长度为77bp（算出来大概就是0.56pmol/ul），然后取7ul做模板，差不多就是4pmol啊，然后引物是10uM的，也就是10pmol/ul，取2.5ul加入到50ul体系，也就是25pmol了
赞一下 回复此楼
4楼2012-02-23 16:50:44
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭