24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 7324  |  回复: 54

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

引用回帖:
20楼: Originally posted by cxnde007 at 2012-02-21 18:04:47:
就是载体大片段的自连

你转过载体么  你说会不会是kan抗性基因退变了
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
21楼2012-02-21 19:35:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

引用回帖:
21楼: Originally posted by fungixx at 2012-02-21 19:35:53:
你转过载体么  你说会不会是kan抗性基因退变了

突变了
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
22楼2012-02-21 19:36:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxnde007

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by fungixx at 2012-02-21 19:36:31:
突变了

转化质粒长得满满一板啊
坚强不是我的错
23楼2012-02-21 20:25:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanglei512

金虫 (正式写手)

小丹木木(金币+2): 鼓励交流 2012-02-22 13:40:06
引用回帖:
18楼: Originally posted by cxnde007 at 2012-02-21 16:38:21:
不好意思,我写错了,是60mg/L,这个浓度相对也是比较大的吧,我今天把浓度减半又试了一下,不知道结果会怎么样,期待ing

这个浓度不高,50——100都行的。我这两天也遇到这种情况了,我自己做的电转的感受态细胞,怎么也不长,时间长了就是那种针尖状的。但是换了化转的感受态细胞长了。所以我建议你把重点放在感受态细胞上,有的时候放假回去了,回来克隆就不行了。不行就买一批新的感受态试试吧。还有就是看看你载体上的SacI和BamHI酶切位点是不是很接近,或者共用了碱基,这种情况也是连接不上的
24楼2012-02-22 11:34:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanglei512

金虫 (正式写手)

如果你的pBI121没有修改过的的话,pBI121载体上有两个BamHI的酶切位点,不知道你为啥用这个点
25楼2012-02-22 11:38:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanglei512

金虫 (正式写手)

引用回帖:
25楼: Originally posted by wanglei512 at 2012-02-22 11:38:44:
如果你的pBI121没有修改过的的话,pBI121载体上有两个BamHI的酶切位点,不知道你为啥用这个点

如果真是这样,那么BamHI这个点是不能用的,
26楼2012-02-22 12:08:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxnde007

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by wanglei512 at 2012-02-22 11:34:16:
这个浓度不高,50——100都行的。我这两天也遇到这种情况了,我自己做的电转的感受态细胞,怎么也不长,时间长了就是那种针尖状的。但是换了化转的感受态细胞长了。所以我建议你把重点放在感受态细胞上,有的时候 ...

这两个酶切位点之间1800多bp呢,感受态也换新的了
坚强不是我的错
27楼2012-02-22 15:28:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxnde007

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by wanglei512 at 2012-02-22 11:38:44:
如果你的pBI121没有修改过的的话,pBI121载体上有两个BamHI的酶切位点,不知道你为啥用这个点

我查过了pBI121序列了,就只有一个BamHI位点啊?
坚强不是我的错
28楼2012-02-22 15:29:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

幽香清远

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我有遇到和你差不多的问题过,后来解决办法是先用sac1切,后用bamH1切。因为后者的效率很高,可以保证切的完全
至于自连都没长,就无法解释了,抗性没有弄错吧
淡香雅致~
29楼2012-02-22 18:56:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxnde007

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by 幽香清远 at 2012-02-22 18:56:26:
我有遇到和你差不多的问题过,后来解决办法是先用sac1切,后用bamH1切。因为后者的效率很高,可以保证切的完全
至于自连都没长,就无法解释了,抗性没有弄错吧

我是先用BamHI切的,再用SacI切的。抗性没问题,哎,无语啦!!!
坚强不是我的错
30楼2012-02-22 19:57:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cxnde007 的主题更新
信息提示
请填处理意见