【答案】应助回帖

几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋

21楼2012-02-21 19:35:53

fungixx

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21楼: Originally posted by fungixx at 2012-02-21 19:35:53:

你转过载体么你说会不会是kan抗性基因退变了

突变了

几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋

22楼2012-02-21 19:36:31

cxnde007

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楼: Originally posted by fungixx at 2012-02-21 19:36:31:
突变了

转化质粒长得满满一板啊

坚强不是我的错

23楼2012-02-21 20:25:56

wanglei512

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小丹木木(金币+2): 鼓励交流 2012-02-22 13:40:06

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18楼: Originally posted by cxnde007 at 2012-02-21 16:38:21:
不好意思，我写错了，是60mg/L，这个浓度相对也是比较大的吧，我今天把浓度减半又试了一下，不知道结果会怎么样，期待ing

这个浓度不高，50——100都行的。我这两天也遇到这种情况了，我自己做的电转的感受态细胞，怎么也不长，时间长了就是那种针尖状的。但是换了化转的感受态细胞长了。所以我建议你把重点放在感受态细胞上，有的时候放假回去了，回来克隆就不行了。不行就买一批新的感受态试试吧。还有就是看看你载体上的SacI和BamHI酶切位点是不是很接近，或者共用了碱基，这种情况也是连接不上的

24楼2012-02-22 11:34:16

wanglei512

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如果你的pBI121没有修改过的的话，pBI121载体上有两个BamHI的酶切位点，不知道你为啥用这个点

25楼2012-02-22 11:38:44

wanglei512

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25楼: Originally posted by wanglei512 at 2012-02-22 11:38:44:
如果你的pBI121没有修改过的的话，pBI121载体上有两个BamHI的酶切位点，不知道你为啥用这个点

如果真是这样，那么BamHI这个点是不能用的，

26楼2012-02-22 12:08:58

cxnde007

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楼: Originally posted by wanglei512 at 2012-02-22 11:34:16:
这个浓度不高，50——100都行的。我这两天也遇到这种情况了，我自己做的电转的感受态细胞，怎么也不长，时间长了就是那种针尖状的。但是换了化转的感受态细胞长了。所以我建议你把重点放在感受态细胞上，有的时候 ...

这两个酶切位点之间1800多bp呢，感受态也换新的了

坚强不是我的错

27楼2012-02-22 15:28:43