24小时热门版块排行榜    

查看: 8577  |  回复: 54

LloveG

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by panda73 at 2012-02-20 22:56:12
双酶切的在线软件,用户名和密码都是test
http://www.bioinfomatics.cn/enzyme/login.php

这个网站,怎么用户名和密码是错的?求救
51楼2013-04-10 13:54:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小虫子666

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

PBI121就是不太好连,本人最近一个月构建了10个载体都是pBI121,目的片段从168-3000bp。有以下几点经验供参考:
1.我发现PBI121在大肠杆菌的拷贝低,做质粒提取时,最好达到过400ng,没有再高过,因此在提质粒是一定要有一个很好的浓度。
2.由于121载体很大14000bp左右,酶切胶回收时,回收产物浓度很低,我经常是只有10ng左右,因此实验要保证121胶回收浓度。
3.我一直用的宝生物的连接酶,你的连接酶应该没有什么问题。我一般都是16度过夜连接。当胶回收浓度低时,把10微升的连接产物加入100微升感受态中。当胶回收浓度高时,可用5微升的连接产物加入50微升感受态中。

BamHI 和SacI酶切位点 直接37h 酶切就可以了 不用分步酶切,慢切 切上5个小时吧,由于121较大,从121上切小片段比较困难。也不知你的内切酶是哪个公司的,我用的是宝生物的。你也可以选择更好的。
不知意见如何,仅供参考
52楼2013-04-10 15:53:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小萧布

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
52楼: Originally posted by 小虫子666 at 2013-04-10 15:53:50
PBI121就是不太好连,本人最近一个月构建了10个载体都是pBI121,目的片段从168-3000bp。有以下几点经验供参考:
1.我发现PBI121在大肠杆菌的拷贝低,做质粒提取时,最好达到过400ng,没有再高过,因此在提质粒是一 ...

请教一下,不知道你的连接体系是怎样,还有你成功连上的,目的片段和载体的浓度怎样,我都做了一个月了还在纠结中,求指教
53楼2013-12-19 21:36:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaozibing55

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
39楼: Originally posted by cxnde007 at 2012-04-22 11:57:13
我已经连上了,不过还是谢谢您的建议...

请问楼主你的问题是怎么解决的呢?  我也是遇到了楼主一样的问题,平板不长菌落
54楼2015-05-15 12:02:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天堂魔鬼

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

55楼2019-06-13 16:57:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cxnde007 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
信息提示
请填处理意见