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cxnde007

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by whb21 at 2012-02-21 09:40:59:
个人感觉你酶切时间有点长,不知道你是否做了空载的空白对照

酶切时间长的话有什么影响呢?不是回切的更完全吗?
坚强不是我的错
11楼2012-02-21 10:36:23
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whb21

木虫 (著名写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by cxnde007 at 2012-02-21 10:36:23:
酶切时间长的话有什么影响呢?不是回切的更完全吗?

酶切反应时间不是越长越好,容易产生非特异性切割,
12楼2012-02-21 15:17:12
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凉亭

银虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by cxnde007 at 2012-02-21 10:29:22:
现在的问题是自连都长不出菌来,还有一个问题就是,我最开始转化涂板培养后,不论培养几天都没有菌长出来,后来就是实验组、对照组都在培养两三天才长出菌来,这是为什么呢?有的菌还能在含抗生素的培养基中要起 ...

你的质粒自连 都不长的话 那就说明酶切后的质粒就有问题 还有一般平板放在37°放过夜就长出克隆来 你好几天才出来的 我想恐怕是杂菌吧 那PCR怎么会扩出来呢
13楼2012-02-21 15:23:12
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

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西瓜(金币+1): 这个是需要注意,哈哈 2012-02-22 18:42:34
’转化、涂板‘ 中间有没有37培养,所用的培养基是不加抗生素的。。。
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
14楼2012-02-21 15:35:10
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凉亭

银虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by cxnde007 at 2012-02-21 10:35:28:
哦,谢谢。感受态没问题,回收产物也测过了,很纯的,回收时也注意了让酒精挥发的问题。不知道卡那浓度一般应该是多少啊?我的卡那工作浓度是600mg/L,这个浓度是不是高呢?转化质粒时长的满满一板,可是自连就一 ...

我觉得你的Kan浓度太高了吧 我刚才查了查自己用的 才10mg/L哎 其实自连的克隆长的少的话 是件好事 就是你转化的带有目的基因的质粒 效率很高嘛
15楼2012-02-21 15:37:47
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cxnde007

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by whb21 at 2012-02-21 15:17:12:
酶切反应时间不是越长越好,容易产生非特异性切割,

哦,谢谢,可是我酶切后回收跑胶检测没问题的,条带是单一的且大小也对的
坚强不是我的错
16楼2012-02-21 16:35:02
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cxnde007

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by fungixx at 2012-02-21 15:35:10:
’转化、涂板‘ 中间有没有37培养,所用的培养基是不加抗生素的。。。

有的,这步是没问题的,37度1h
坚强不是我的错
17楼2012-02-21 16:35:59
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cxnde007

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by 凉亭 at 2012-02-21 15:37:47:
我觉得你的Kan浓度太高了吧 我刚才查了查自己用的 才10mg/L哎 其实自连的克隆长的少的话 是件好事 就是你转化的带有目的基因的质粒 效率很高嘛

不好意思,我写错了,是60mg/L,这个浓度相对也是比较大的吧,我今天把浓度减半又试了一下,不知道结果会怎么样,期待ing
坚强不是我的错
18楼2012-02-21 16:38:21
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

引用回帖:
9楼: Originally posted by cxnde007 at 2012-02-21 10:29:22:
现在的问题是自连都长不出菌来,还有一个问题就是,我最开始转化涂板培养后,不论培养几天都没有菌长出来,后来就是实验组、对照组都在培养两三天才长出菌来,这是为什么呢?有的菌还能在含抗生素的培养基中要起 ...

对照组 加的什么?
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
19楼2012-02-21 17:42:04
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cxnde007

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by fungixx at 2012-02-21 17:42:04:
对照组 加的什么?

就是载体大片段的自连
坚强不是我的错
20楼2012-02-21 18:04:47
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