应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于Ni-NTA纯化蛋白
52/1返回列表
查看: 3062  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

rsgd1990

银虫 (初入文坛)

[交流] 关于Ni-NTA纯化蛋白 已有7人参与

我在实验室纯化一个蛋白，超声波破碎菌体后离心，将上清液过柱子，bindbuffer 的咪唑为10mM,wash buffer 的咪唑为20mM和100mM,elutebuffer 的咪唑为250mM，ph都是8。最后蛋白没有洗下来，还在柱子上。
于是我加大elutebuffer的咪唑浓度，变为400mM,结果还是洗不下来。
老师就让我降低ph试试，今天我把ph调到6.5，但还是不行，明天打算降到5.5试试。

各位有没有遇到这种情况的？是不是ph的原因啊？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2012-02-17 23:04:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

873801800

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by rsgd1990 at 2012-02-21 16:14:05:
40ml菌液离心，菌体用7ml PBS 重悬，超声波破碎的

再浓缩一下试试呢 我今天100mL菌液，4ml加6M尿素的bind buffer 上样的 似乎纯化出来了
赞一下 回复此楼
17楼2012-02-22 21:43:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

会飞的害虫

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+4): Good！ 2012-02-18 21:49:58
正常来说不会是PH值的问题
1.确定有可溶蛋白存在上清液中；
2.蛋白确实挂柱了；
3.检测过洗涤液中的蛋白（正常来说，洗涤液咪唑不会超过50,100很多蛋白已经洗走）
如果以上三条都确认了，建议柱子再生，所有溶液重新配一次。
赞一下 回复此楼
不是没有，而是你看不见。
2楼2012-02-18 11:30:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

873801800

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
你用的都是自己配的buffer呗？我用的试剂盒，结果也是什么都没有，不知道为什么，你的上清液上样量是多少呀？
赞一下 回复此楼
3楼2012-02-18 20:12:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jingzhang08

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
有没有看flow through里面有没有啊，就是有没有确实挂在柱子上啊
赞一下 回复此楼
4楼2012-02-19 22:44:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 289求调剂 +8 硕星赴 2026-03-23 8/400 2026-03-24 20:17 by peike
[考研] 一志愿南航材料专317分求调剂 +5 炸呀炸呀炸薯条 2026-03-23 5/250 2026-03-24 16:52 by 星空星月
[考博] 申博26年 +4 八6八68 2026-03-19 4/200 2026-03-24 15:49 by 小Ben呵呵
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +4 曼111 2026-03-24 5/250 2026-03-24 15:44 by 星空星月
[考研] 070300，一志愿北航320求调剂 +3 Jerry0216 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:16 by 。。堂堂
[考研] 293求调剂 +3 涛涛Wjt 2026-03-22 5/250 2026-03-22 22:21 by jiangpengfei
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 298求调剂一志愿211 +3 上岸6666@ 2026-03-20 3/150 2026-03-22 15:50 by ColorlessPI
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 318求调剂 +4 plum李子 2026-03-21 7/350 2026-03-22 14:17 by ColorlessPI
[考研] 材料求调剂 +5 @taotao 2026-03-21 5/250 2026-03-21 20:55 by lbsjt
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿南大，0703化学，分数336，求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 材料学学硕080502 337求调剂-一志愿华中科技大学 +4 顺顺顺mr 2026-03-18 5/250 2026-03-21 10:22 by luoyongfeng
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:32 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
[考研] 本科郑州大学物理学院，一志愿华科070200学硕，346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭