应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白质很纯，但不长晶体
51/1返回列表
查看: 4944  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

格格Caroline

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白质很纯，但不长晶体

小妹刚刚学习蛋白质结晶，有很多不会的地方。
我做的蛋白350个aa，很纯了，点晶体就是不长，不是直接沉淀了就是透明的，预测了没有什么信号肽之类的，求助啊！！！！！！！就是不长~！！！！我应该在哪些方面在进行改进呢！！！谢谢谢谢！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质实验技术 【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-02-14 21:34:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

BioChemCom

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 辛苦~ 2012-02-15 22:22:07
格格Caroline(金币+3): ★★★★★最佳答案 2012-02-16 10:45:29
1. 如果是个“乙烯形成酶”（乙烯合成酶？），那么这个信息挺好的。你可以用Pfam，SMART或者Uniprot确定这个酶的domain区，一般来说，C端或者N端还是会有一些无规则序列。可以适当的截断，多尝试几种构建。

2. 在PDB里面，找找同源的晶体结构，其实Uniprot里面会提供。很多时候，SMART也会给出来，这里也可以获得很多结构信息或者序列信息。

3. 二级结构的预测，一般来说，PSIPRED比较权威。比较好使。

4. 不管有没有二硫键，只要有Cys的话，就要在纯化的过程中，加入一些DTT，巯基乙醇或者TECP。

5. 如果是金属辅酶的话，要看情况，在表达过程（可以和IPTG同时加）中或者裂解细胞过程中加入相应的盐溶液。

6. 最关键的地方是：看文献，看看以前的研究给出那些信息。
赞一下(2人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

格格Caroline
6楼2012-02-15 20:44:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

wgl365

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
格格Caroline: 回帖置顶 2012-02-15 20:30:22
格格Caroline: 取消置顶 2012-02-15 20:30:43
你点晶体要用那个筛选试剂盒呀！有很多条件的呀！都不长吗？
赞一下 回复此楼
思想是行动的种子！
2楼2012-02-15 17:12:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

BioChemCom

银虫 (小有名气)
格格Caroline: 回帖置顶 2012-02-15 20:26:04
西瓜(金币+3): Good！ 2012-02-15 22:21:27
这个方面的问题，其实挺复杂的，你给出的哦信息也不够明确。我觉得有几件事情需要考虑。
1. 你的蛋白构建是不是够好，两端的无规则序列是否删除了？
2. 就算两端都删除了，还是要做一系列的截断构建，用于探索可能的稳定表达的结构域。这些可以通过已有的晶体结构、生物信息学相关的分析软件来获得信息。
3. 纯化过程，也有一些问题要考虑，温度、Ni-NTA，分子筛和离子柱。

希望有更详细的信息。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2012-02-15 17:16:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nach

铜虫 (著名写手)

不让吃就去死

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
ph 和沉淀剂浓度 是最先考虑的
赞一下 回复此楼
不让吃就去死
4楼2012-02-15 20:02:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 3/150 2026-08-30 02:29 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 02:09 by ZPa0EcMwuECS
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 01:47 by ZPa0EcMwuECS
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 01:45 by ZPa0EcMwuECS
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 01:36 by ZPa0EcMwuECS
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-30 01:12 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-30 01:03 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +16 爱看书的可乐 2026-08-26 18/900 2026-08-30 00:59 by winsaint
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 10/500 2026-08-30 00:53 by ZPa0EcMwuECS
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-30 00:52 by ZPa0EcMwuECS
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-30 00:52 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 面上意见出来了 +8 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 16/800 2026-08-29 20:45 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 9/450 2026-08-29 09:59 by jklily
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭