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格格Caroline新虫 (初入文坛)
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[求助]
蛋白质很纯，但不长晶体
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小妹刚刚学习蛋白质结晶，有很多不会的地方。 我做的蛋白350个aa，很纯了，点晶体就是不长，不是直接沉淀了就是透明的，预测了没有什么信号肽之类的，求助啊！！！！！！！就是不长~！！！！我应该在哪些方面在进行改进呢！！！谢谢谢谢！ |
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 蛋白质实验技术 | 【分子生物】EPI帖 |
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西瓜(金币+5, MolEPI+1): 辛苦~ 2012-02-15 22:22:07
格格Caroline(金币+3): ★★★★★最佳答案 2012-02-16 10:45:29
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 辛苦~ 2012-02-15 22:22:07
格格Caroline(金币+3): ★★★★★最佳答案 2012-02-16 10:45:29
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1. 如果是个“乙烯形成酶”（乙烯合成酶？），那么这个信息挺好的。你可以用Pfam，SMART或者Uniprot确定这个酶的domain区，一般来说，C端或者N端还是会有一些无规则序列。可以适当的截断，多尝试几种构建。 2. 在PDB里面，找找同源的晶体结构，其实Uniprot里面会提供。很多时候，SMART也会给出来，这里也可以获得很多结构信息或者序列信息。 3. 二级结构的预测，一般来说，PSIPRED比较权威。比较好使。 4. 不管有没有二硫键，只要有Cys的话，就要在纯化的过程中，加入一些DTT，巯基乙醇或者TECP。 5. 如果是金属辅酶的话，要看情况，在表达过程（可以和IPTG同时加）中或者裂解细胞过程中加入相应的盐溶液。 6. 最关键的地方是：看文献，看看以前的研究给出那些信息。 |
格格Caroline6楼2012-02-15 20:44:13
2楼2012-02-15 17:12:29
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