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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何从已知细胞中P出某个基因，并加上酶切位点？
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hshzhq

铜虫 (正式写手)

[交流] 如何从已知细胞中P出某个基因，并加上酶切位点？

现在分子实验开始的基因获取主要有两种：1、购买含有目的基因的载体，这个需要花钱；2、直接从已知表达细胞里面P出该基因。这次命题以第二种为目的，以human的Actin基因为目标，请设计P出该基因的引物，需要解释清楚引物的位置和设计特点，两端的酶切位点可以由各会员随意设计两个不同的酶切系列即可。
    希望各回答会员能解释一下设计的特点和原理。
    提示：需要将大部分序列给出。
序列信息参见：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NM_001100.3
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1楼 2012-02-13 19:05:51
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hshzhq

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by exon2002 at 2012-02-14 08:45:10:
Actin是砍价基因，在两端设计好引物后，从绝大多数细胞（组织中都可以扩增出来的。引物的设计根据所需片段的大小和所需的片段位置来定。一般做内参并无此项要求，但不知你指的是什么。

你只需要设计出引物，需要在引物中添加酶切位点序列。只需要能将该基因在DNA基因组中提取出来就是了。
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7楼2012-02-14 13:36:18
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exon2002

铁杆木虫 (著名写手)
★
hshzhq(金币+1):谢谢参与
小丹木木(金币+2): 鼓励回帖，情人节快乐！ 2012-02-14 10:41:52
Actin是砍价基因，在两端设计好引物后，从绝大多数细胞（组织中都可以扩增出来的。引物的设计根据所需片段的大小和所需的片段位置来定。一般做内参并无此项要求，但不知你指的是什么。
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2楼2012-02-14 08:45:10
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exon2002

铁杆木虫 (著名写手)
纠正笔误：砍价=看家
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3楼2012-02-14 08:45:48
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imyting

至尊木虫 (正式写手)
★
hshzhq(金币+1):谢谢参与
引物最好自己设计，借别人之手不是长远之计，各种设计原则论坛中多得很。
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4楼2012-02-14 11:14:16
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