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luba

新虫 (小有名气)

[求助] 感受态细胞里到底有没有质粒？

如题，实验室的感受态细胞是自己做的，我想知道这个细胞里本身有没有质粒。网上看人家说买来的商业化的感受态是不含质粒的，那自己做的呢。如果说它本身有质粒，那我抽出来的就不仅是我想要的质粒了，就是个混合物了吧？那该怎么检测，怎么分离呢？不分的话会影响到后续转染、表达实验吗？
还有，我转化的菌，提出来的质粒有几个浓度特低，除了低拷贝外还有别的什么原因吗？会不会是杂菌？杂菌如碰巧能在含抗生素的培养基上长的话，是不是质粒提出来就很低还是应该和目的菌一样的高？
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1楼 2012-02-11 21:01:05
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karin

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
wanhscn(金币+2): 鼓励应助～有道理 2012-02-16 14:01:51
感受态细胞一般是不含质粒的，如果怀疑自己的感受态污染的话，可以将制备感受态的菌株、制备好未做转化的感受态细胞在抗性培养基上涂一下，看有没有污染。最好不要用有污染的感受态，若转化菌生长良好而提质粒情况一直不好的话，考虑污染吧。重新制备感受态或买商业化的吧。
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坚持就是胜利
2楼2012-02-16 13:56:36
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luba

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by karin at 2012-02-16 13:56:36:
感受态细胞一般是不含质粒的，如果怀疑自己的感受态污染的话，可以将制备感受态的菌株、制备好未做转化的感受态细胞在抗性培养基上涂一下，看有没有污染。最好不要用有污染的感受态，若转化菌生长良好而提质粒情况 ...

谢谢，不过我的意思是感受态细胞里有没有它自然生长情况下自带的质粒？不一定是有抗性的，也就是说有没有可能我这个做完转化的细胞里既含我转进去的抗性质粒，又含普通的无抗性的质粒？您说的“感受态细胞一般是不含质粒的”是指用一般的方法制作感受态细胞可以去除细菌里本来的质粒吗？还是什么别的意思？
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3楼2012-02-16 14:35:23
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liuxueshu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是不含的吧，可以把感受态培养一下，看看能不能提到质粒
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生物的世界！
4楼2012-02-16 15:55:27
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karin

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by luba at 2012-02-16 14:35:23:
谢谢，不过我的意思是感受态细胞里有没有它自然生长情况下自带的质粒？不一定是有抗性的，也就是说有没有可能我这个做完转化的细胞里既含我转进去的抗性质粒，又含普通的无抗性的质粒？您说的“感受态细胞一般是 ...

我认为是不带质粒的，制备感受态的过程不会去除质粒。
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坚持就是胜利
5楼2012-02-16 16:08:32
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斯多格格

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by luba at 2012-02-16 14:35:23:
谢谢，不过我的意思是感受态细胞里有没有它自然生长情况下自带的质粒？不一定是有抗性的，也就是说有没有可能我这个做完转化的细胞里既含我转进去的抗性质粒，又含普通的无抗性的质粒？您说的“感受态细胞一般是 ...

即使你的感受态细胞里有不含抗性的自带质粒，在你做筛选的时候已经作为阴性被排除了，对实验影响不大吧？
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书自香我何须花
6楼2012-02-16 17:08:41
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达菲鸭

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
luba(金币+5): ★★★★★最佳答案 2012-02-25 02:04:02
感受态里有质粒也是一种正常现象，你可以培养感受态并提个质粒看看，很快的~
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7楼2012-02-17 10:02:14
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牧羊兰

新虫 (初入文坛)
Lz我也有跟你一样的困惑～不知道你有没有解决呢，可以交流一下，我最近也在做转化
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8楼2015-06-14 15:24:34
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