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yoyoyoyo3985

金虫 (小有名气)

[交流] 染色剂的浓度对DNA电泳亮度有多大影响 已有2人参与

我最近在做克隆,整天pcr,酶切回收,连接的工作。一直是根据电泳亮度来判断DNA片段的浓度,可是发现,同样的东西,酶切前加2ul做浓度检测的亮度和酶切了40ul后跑电泳的亮度居然差不多,难道是因为染色剂的多少带来这种差异?
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shuishui007

木虫 (小有名气)

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amisking(金币+3): 新年愉快 2012-01-19 19:54:32
染色剂对目标DNA片段的影响和对Marker的影响是一致的。目标DNA的浓度是根据其与Marker相对亮度来确定的,因此染色剂的差异对浓度检测没有太大作用的。回收效率因目标片段的长度、方法和个人操作等原因可能差异较大,这是应该重点注意的。
2楼2012-01-19 09:49:04
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chimindu

捐助贵宾 (正式写手)

荧光DuBoss


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amisking(金币-50): 广告贴! 2012-01-19 19:54:54
准确的浓度,最好用PicaGreen的方法定量测定,具体可咨询北京泛博生物化学有限公司的杜池敏博士,他是专门做荧光染料和荧光探针的.
3楼2012-01-19 11:03:35
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yoyoyoyo3985

金虫 (小有名气)

引用回帖:
楼: Originally posted by shuishui007 at 2012-01-19 09:49:04:
染色剂对目标DNA片段的影响和对Marker的影响是一致的。目标DNA的浓度是根据其与Marker相对亮度来确定的,因此染色剂的差异对浓度检测没有太大作用的。回收效率因目标片段的长度、方法和个人操作等原因可能差异较大 ...

谢谢,因为我们实验室染色剂不是加在胶里,而且marker和loading buffer里面的染色剂没有一致,所以我担心有影响,我回头讲染色剂浓度调成一样再试试
难免埋怨时间的手,把相爱写成相爱过
4楼2012-01-20 13:17:58
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yoyoyoyo3985

金虫 (小有名气)

引用回帖:
楼: Originally posted by chimindu at 2012-01-19 11:03:35:
准确的浓度,最好用PicaGreen的方法定量测定,具体可咨询北京泛博生物化学有限公司的杜池敏博士,他是专门做荧光染料和荧光探针的.

谢谢提供信息~
难免埋怨时间的手,把相爱写成相爱过
5楼2012-01-20 13:18:10
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shuishui007

木虫 (小有名气)

★
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浓度没那么重要,我做克隆时多数是盲连,加0.5微升的质料(约几纳克),剩下的加目的片段,也没问题。
6楼2012-01-21 12:06:11
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