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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 染色剂的浓度对DNA电泳亮度有多大影响
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yoyoyoyo3985

金虫 (小有名气)

[交流] 染色剂的浓度对DNA电泳亮度有多大影响 已有2人参与

我最近在做克隆，整天pcr，酶切回收，连接的工作。一直是根据电泳亮度来判断DNA片段的浓度，可是发现，同样的东西，酶切前加2ul做浓度检测的亮度和酶切了40ul后跑电泳的亮度居然差不多，难道是因为染色剂的多少带来这种差异？
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难免埋怨时间的手，把相爱写成相爱过
1楼 2012-01-19 07:26:17
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shuishui007

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
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amisking(金币+3): 新年愉快 2012-01-19 19:54:32
染色剂对目标DNA片段的影响和对Marker的影响是一致的。目标DNA的浓度是根据其与Marker相对亮度来确定的，因此染色剂的差异对浓度检测没有太大作用的。回收效率因目标片段的长度、方法和个人操作等原因可能差异较大，这是应该重点注意的。
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2楼2012-01-19 09:49:04
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chimindu

捐助贵宾 (正式写手)

荧光DuBoss
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amisking(金币-50): 广告贴！ 2012-01-19 19:54:54
准确的浓度,最好用PicaGreen的方法定量测定,具体可咨询北京泛博生物化学有限公司的杜池敏博士,他是专门做荧光染料和荧光探针的.
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3楼2012-01-19 11:03:35
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yoyoyoyo3985

金虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by shuishui007 at 2012-01-19 09:49:04:
染色剂对目标DNA片段的影响和对Marker的影响是一致的。目标DNA的浓度是根据其与Marker相对亮度来确定的，因此染色剂的差异对浓度检测没有太大作用的。回收效率因目标片段的长度、方法和个人操作等原因可能差异较大 ...

谢谢，因为我们实验室染色剂不是加在胶里，而且marker和loading buffer里面的染色剂没有一致，所以我担心有影响，我回头讲染色剂浓度调成一样再试试
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难免埋怨时间的手，把相爱写成相爱过
4楼2012-01-20 13:17:58
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yoyoyoyo3985

金虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by chimindu at 2012-01-19 11:03:35:
准确的浓度,最好用PicaGreen的方法定量测定,具体可咨询北京泛博生物化学有限公司的杜池敏博士,他是专门做荧光染料和荧光探针的.

谢谢提供信息~
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难免埋怨时间的手，把相爱写成相爱过
5楼2012-01-20 13:18:10
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shuishui007

木虫 (小有名气)
★
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浓度没那么重要，我做克隆时多数是盲连，加0.5微升的质料（约几纳克），剩下的加目的片段，也没问题。
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6楼2012-01-21 12:06:11
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