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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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杨文心

木虫 (小有名气)

[求助] 求易错PCR高手帮忙

高手们,你们好,我在做易错PCR实验,用的是美国进口的GeneMorph2 random Mutagenesis Kit,但是做了很多轮,送出去大约有40个样品测序,但是都没有一个突变的,求高手帮忙分析下原因呀,小弟非常感谢
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doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+4, MolEPI+1): Good! 2012-01-18 18:47:41
1.降温,
2.多加taq,
3.采用不同的dNTP(四种不同浓度)
4.加Mn离子
没必要按试剂盒吧
3楼2012-01-18 17:23:47
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jiaxinfish

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+2): 鼓励交流! 2012-01-18 18:47:02
这个应该是有点像error-prone PCR样子的实验吧,我觉得都没必要买什么kit,就用国产的Taq酶就可以,如果你的突变不多,那好办,你把PCR产物稀释个百来倍,取1ul做模板,再扩一次,如果觉得还不够多突变,重复个2-3次,我保证你的产物里一半以上是突变的。
2楼2012-01-18 16:56:28
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