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杨文心

木虫 (小有名气)

[求助] 求易错PCR高手帮忙

高手们，你们好，我在做易错PCR实验，用的是美国进口的GeneMorph2 random Mutagenesis Kit，但是做了很多轮，送出去大约有40个样品测序，但是都没有一个突变的，求高手帮忙分析下原因呀，小弟非常感谢
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1楼 2012-01-18 15:06:06
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doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+4, MolEPI+1): Good！ 2012-01-18 18:47:41
1.降温，
2.多加taq，
3.采用不同的dNTP(四种不同浓度）
4.加Mn离子
没必要按试剂盒吧
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3楼2012-01-18 17:23:47
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jiaxinfish

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+2): 鼓励交流！ 2012-01-18 18:47:02
这个应该是有点像error-prone PCR样子的实验吧，我觉得都没必要买什么kit，就用国产的Taq酶就可以，如果你的突变不多，那好办，你把PCR产物稀释个百来倍，取1ul做模板，再扩一次，如果觉得还不够多突变，重复个2-3次，我保证你的产物里一半以上是突变的。
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2楼2012-01-18 16:56:28
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