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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 农杆菌转化出问题
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qian0wei

银虫 (初入文坛)

[求助] 农杆菌转化出问题 已有1人参与

用农杆菌AGL0（自制感受态），转化涂板后平板上总是湿湿的，貌似有一堆堆的东西，空白板涂板后也有这种情况，抗生素是AMP，求助是什么问题，如何解决？
感觉AMP没有失效，作T克隆转化时可以正常蓝白班筛选
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1楼 2012-01-12 17:49:56
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking(金币+2): 版主很专业啊 2012-01-12 21:17:45
是涂板之后马上看到的现象还是培养一段时间之后才出现的问题？如果是前者，可能是水分太多了。涂板前可以先在室温晾十几分钟，让多余的水分蒸发掉。
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2楼2012-01-12 21:13:14
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qian0wei

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-01-12 21:13:14:
是涂板之后马上看到的现象还是培养一段时间之后才出现的问题？如果是前者，可能是水分太多了。涂板前可以先在室温晾十几分钟，让多余的水分蒸发掉。

是培养一段时间（过夜）之后，才出现的问题，涂板时已经晾干了的
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3楼2012-01-12 21:35:59
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
这个就不知道了……有没有可能是菌长得太浓了?
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4楼2012-01-12 22:25:40
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xujiemeng09

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+1): --！ 2012-01-13 11:43:47
农杆菌好像的加利福平诶
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你若不想做，会找到一个借口；你若想做，会找到一个方法。
5楼2012-01-13 00:03:25
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yxwjimmy

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+1): 鼓励交流经验 2012-01-13 11:43:59
我个人的经验是，用AMP筛农杆菌不好用啊，植物表达载体尽量不要选Amp抗性的。
顺便问一下，您有 Agrobacterium tumefaciens AGL-1 菌株吗？
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6楼2012-01-13 10:48:07
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sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
貌似之前做农杆菌是用利福平，如果是Amp的，一般会浓度加倍去筛选。
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你的日子如何，你的力量也必如何！
7楼2012-01-13 14:26:50
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宫保鸡丁YZ

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

农杆菌对Amp会产生一定抗性，所以用Amp不能有效的筛选。建议你用carbenicillin来筛选，可以获得理想的效果，虽然carbenicillin比较贵。
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面包会有的，牛奶也会有的
8楼2015-11-09 10:05:48
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