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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 急救！！！关于农杆菌转化的一些问题
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lw19850128

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jhu132llh(金币+4, APEPI+1): 鼓励积极分享 2012-01-06 16:45:05
XLJ海阔天空(金币+1): ★★★★★最佳答案 非常感谢您耐心详细的解答，非常感谢您！ 2012-01-06 20:08:30
先简单回答下你的问题：
1，理论上可行，但经过农杆菌处理后，细胞都会受到程度不同的伤害，很可能影响细胞的生长和分化，如果侵染后严重影响，可以改变侵染的菌液浓度 和时间。另外侵染过后将愈伤或外植体置于条件适宜的恢复培养基培养也很重要。另外，你再生体系的再生效率能达到多少？
2，侵染后愈伤组织难以分化比较正常，加kan后变黄应该是未转入抗性基因的细胞，继代后变疏松不知你继代前后培养基有什么区别，还是建议侵染或共培后先在不加筛选剂的培养基上恢复一个周期。
3，这种情况也比较常见，正常来讲个体差异存在，不过其他影响因素也比较多，不知你的外植体取得什么部位？很容易辨认么？
4，如果是kan筛选的话是会出现这种情况，kan本身就很不稳定，尤其是加入培养基的时候不能太热，另外不知道你做梯度试验的个体数有多少，太少的话也不容易对照出来，不确定苜蓿转化的情况，对于其他植物来说200mg已经比较大的浓度了，建议试下100mg。

植物转基因本来就很难，周期长，且每一步都可能影响到最后的转化结果，再生体系正常的话（效率50%以上吧），主要精力需要放在侵染条件控制上，毕竟农杆菌的侵染还是会对植物细胞造成损伤。简单讲讲，我也算是新手。
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XLJ海阔天空
2楼2012-01-06 09:38:53
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