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XLJ海阔天空金虫 (小有名气)
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[求助]
急救！！！关于农杆菌转化的一些问题
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虫友们好! 我i是做的苜蓿的转基因，遇见以下问题，请各位朋友帮助，马上就该毕业了，转基因还是没长出来，急死了！实验室之前没人做过这方面的，急需您的指点！！！ 1、再生体系已经建立，成功获得再生植株。然后我就按照再生体系的培养基配方来做转化。自己认为理论上用相同的培养基肯定应该可以转化出苗的，但是一直没有结果。我的这种假设是错误的吗？ 2、在农杆菌侵染过后，外植体形成胚性愈伤较难，加卡纳筛选后很多都褐化，或者发黄。有的前期看着状态蛮好，但是继代一次，愈伤就变的疏松，没有内核，不知道是什么缘故？ 3、相同的品种、相同的部位的外植体，培养基、培养条件什么的全都相同，但是在预培养3天后，有的下胚轴愈伤启动，但是有的发褐，这种情况在我筛选合适的细胞分裂素浓度和生长素浓度时也屡次出现。不知道是什么原因，难道外植体本身个体差异那么大？ 4、在看不同抗生素浓度对愈伤形成及生长的影响时，抗生素600mg/l时居然比抗生素浓度200mg/l的愈伤长势还好？每个处理3个重复的话，都会有一个愈伤一个也不长，发黄，没反应了，郁闷，筛选不出来结果 请指教，万分感谢！！！ |
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XLJ海阔天空
金虫 (小有名气)
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- 注册: 2010-06-28
- 性别: MM
- 专业: 草地科学
送鲜花一朵SongQ5285: 看来交流很重要。。。 2012-01-06 23:55:18
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首先真的非常感谢您的耐心详细的回复，真后悔没有早点发帖！嘿嘿 1、我是选了四个品种，愈伤诱导培养基相同，5个不同的分化培养基筛选，因为污染等原因，最后只有一个品种的一种分化培养基分化出苗，陆陆续续的，再生效率在55%左右吧，后来转化体系就按照再生体系的这个来做转化了。 2、继代前后的的培养基是相同的。目前做着几批，就先不加卡纳，暗培养一周。 3、外植体用的下胚轴，后来又尝试子叶、叶柄。您说的容易辨认是指什么啊？ 4、卡纳我筛选也是上面那这种情况，然后看文献上很多都是用的50mg，就按50mg加了。每个处理3个重复，每个重复1皿，25个外植体。 谢谢你给的建议！！！ |
3楼2012-01-06 20:47:12
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