24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2914  |  回复: 6

498243829

金虫 (初入文坛)

[求助] 凝血酶失活问题

凝血酶最佳失活条件?凝血酶与适配体结合的反应Buffer是怎样的?

[ Last edited by 498243829 on 2012-1-2 at 19:36 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励应助,还很专业,赞一个! 2012-01-03 11:10:26
498243829(金币+5): 有帮助 谢谢! 2012-01-04 15:35:46
加热到一定温度肯定能失活,这个酶不像限制性内切酶,还标明了失活条件。凝血酶与适配体结合,需要适配体形成一定的构象,也就是G四聚体结构,K离子能稳定这种G四聚体结构,所以一般缓冲液中都含有几十mM的K离子。
低调务实!
2楼2012-01-03 10:47:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

498243829

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by 更深的蓝 at 2012-01-03 10:47:48:
加热到一定温度肯定能失活,这个酶不像限制性内切酶,还标明了失活条件。凝血酶与适配体结合,需要适配体形成一定的构象,也就是G四聚体结构,K离子能稳定这种G四聚体结构,所以一般缓冲液中都含有几十mM的K离子。

我用过95度10min、20min、30min对实验还是有干扰,这样的条件还不足以让它完全失活吗?还是它失活之后也干扰,假若失活后它聚沉,对DNA链有吸附之类的?
我用的缓冲是20 mmol L T ris HCl,PH7.4
140 mmol /L 的 NaCl, 5 mmol /L KCl, 1 mmol/ L CaCl2 , 1 mmol/ L MgCl2 , 妥当否?实验不顺利,我也不清楚是否缓冲不合适
仁兄想必是这方面的高手,多给点指点吧,在下感激涕淋呀!
3楼2012-01-03 22:58:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): good! 2012-01-04 12:21:10
这个条件应该会使凝血酶完全变性,你做实验的这个浓度的蛋白,变性后应该是不会聚沉的。至于你实验中的干扰,你可以用其它蛋白做个对照,看看是否也有干扰。
低调务实!
4楼2012-01-04 09:17:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xhjggl

木虫 (正式写手)

可以下载看看上海生工产品编号BSP032-7的说明书
5楼2012-01-04 16:46:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yz2007433052

木虫 (职业作家)

四楼说的很对
激浪青春!
6楼2012-01-05 21:51:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zjlshsh

新虫 (初入文坛)

凝血酶最佳失活条件是激活后的五大要素
1,保存时间
2,温度
3,ph值
4,蛋白含量
5,钙离子浓度
7楼2013-01-06 13:33:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 498243829 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料334求调剂 +20 Eecho# 2026-04-03 20/1000 2026-04-08 21:16 by Kilig0317
[考研] 0703调剂,一志愿天津大学319分 +23 haaaabcd 2026-04-05 26/1300 2026-04-08 16:19 by luoyongfeng
[考研] 275求调剂 +4 1624447980 2026-04-08 5/250 2026-04-08 15:29 by 哦哦123
[考研] 273求调剂 +41 麦小叮当 2026-04-06 48/2400 2026-04-08 15:16 by screening
[考研] 336求调剂,一志愿中科大 +9 墨彧 yuyu 2026-04-06 9/450 2026-04-08 11:24 by 想读书的菌菌
[考研] 一志愿211电子信息347求调剂 +3 554916 2026-04-03 3/150 2026-04-07 23:22 by 如若时光倒流
[考研] 一志愿 江南大学 085602 化工专硕 338分求调剂 +15 路痴小琪 2026-04-05 15/750 2026-04-06 09:27 by cql1109
[考研] 308求调剂 +3 终不似从前 2026-04-05 3/150 2026-04-05 22:23 by hemengdong
[考研] 考研调剂生寻找导师 +3 顾瞻考研啊 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:18 by 啵啵啵0119
[考研] 284求调剂 +7 徐同学_001 2026-04-04 13/650 2026-04-05 17:19 by yulian1987
[考研] 一志愿上海海洋大学083200食品学硕,求调剂,接受其他专业083200 +4 what张 2026-04-04 5/250 2026-04-05 14:07 by chw1980_0
[考研] 298求调剂 +7 manman511 2026-04-05 7/350 2026-04-05 10:29 by 唐沐儿
[论文投稿] 求文献 5+3 ys879651$ 2026-04-02 3/150 2026-04-04 17:22 by bobvan
[考研] 材料科学与工程考研 +10 拯救皮特托先生 2026-04-02 10/500 2026-04-03 23:57 by userper
[考研] 281求调剂 +10 aaawhy 2026-04-03 10/500 2026-04-03 21:42 by lbsjt
[考研] 294求调剂 +6 Grey_Ey 2026-04-03 6/300 2026-04-03 20:46 by 欣喜777
[考研] 286求调剂 +8 lim0922 2026-04-02 8/400 2026-04-03 20:19 by rzh123456
[考研] 338求调剂 +7 晟功? 2026-04-03 7/350 2026-04-03 16:46 by wxiongid
[考研] 材料调剂 +4 一样YWY 2026-04-03 4/200 2026-04-03 09:48 by 蓝云思雨
[考研] 283求调剂 +3 jiouuu 2026-04-02 4/200 2026-04-02 14:08 by 哒哒哒呱呱呱
信息提示
请填处理意见