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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 凝血酶失活问题
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498243829

金虫 (初入文坛)

[求助] 凝血酶失活问题

凝血酶最佳失活条件？凝血酶与适配体结合的反应Buffer是怎样的？

[ Last edited by 498243829 on 2012-1-2 at 19:36 ]
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1楼 2012-01-02 19:33:44
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更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): good！ 2012-01-04 12:21:10
这个条件应该会使凝血酶完全变性，你做实验的这个浓度的蛋白，变性后应该是不会聚沉的。至于你实验中的干扰，你可以用其它蛋白做个对照，看看是否也有干扰。
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低调务实！
4楼2012-01-04 09:17:24
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更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励应助，还很专业，赞一个! 2012-01-03 11:10:26
498243829(金币+5): ★有帮助 谢谢！ 2012-01-04 15:35:46
加热到一定温度肯定能失活，这个酶不像限制性内切酶，还标明了失活条件。凝血酶与适配体结合，需要适配体形成一定的构象，也就是G四聚体结构，K离子能稳定这种G四聚体结构，所以一般缓冲液中都含有几十mM的K离子。
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低调务实！
2楼2012-01-03 10:47:48
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498243829

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by 更深的蓝 at 2012-01-03 10:47:48:
加热到一定温度肯定能失活，这个酶不像限制性内切酶，还标明了失活条件。凝血酶与适配体结合，需要适配体形成一定的构象，也就是G四聚体结构，K离子能稳定这种G四聚体结构，所以一般缓冲液中都含有几十mM的K离子。

我用过95度10min、20min、30min对实验还是有干扰，这样的条件还不足以让它完全失活吗？还是它失活之后也干扰，假若失活后它聚沉，对DNA链有吸附之类的？
我用的缓冲是20 mmol L T ris HCl,PH7.4
140 mmol /L 的 NaCl, 5 mmol /L KCl, 1 mmol/ L CaCl2 , 1 mmol/ L MgCl2 , 妥当否？实验不顺利，我也不清楚是否缓冲不合适
仁兄想必是这方面的高手，多给点指点吧，在下感激涕淋呀！
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3楼2012-01-03 22:58:31
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xhjggl

木虫 (正式写手)
可以下载看看上海生工产品编号BSP032-7的说明书
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5楼2012-01-04 16:46:07
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