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小彩84

新虫 (初入文坛)

[求助] 如何确定氨基酸衍生检测VWD检测器的波长转换时间?

现在作氨基酸检测,用的是OPA-FMOC柱前衍生,用的是Agilent 1100液相系列,标配的是VWD检测器。衍生检测过程中需要在检测器设置了设置时间表进行波长转换(338转到262nm)。本人刚开始作氨基酸,也是用液相的新手,有做过这方面的虫友过来交流一下?
我是不是要先把波长设为338nm,扫一遍谱图,然后把波长设为262nm再扫一遍谱图,两个谱图峰交接的时间点就是波长转换的时间?表达的有点乱,大家看下面的图吧,是不是红色的线对应的时间点?(从AAA柱使用说明书上截的两个图,我自己还没扫呢,拿来打个比方)


[ Last edited by 小彩84 on 2011-12-29 at 07:17 ]
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小彩84

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by Tracy斌 at 2012-03-01 19:57:04:
麻烦问下你的衍生剂OPA怎么配的,梯度洗脱怎么分配的。

10mg/mL OPA试剂:精密称取100mgOPA于10mL的容量瓶中,用1mL无水乙醇溶解后,加入0.1mL 3-MPA,然后用硼酸缓冲液定容并混匀。用0.45μm针头过滤器过滤后,于4℃冰箱中避光分装保存,有效期为一周。
但是放冰箱里发现结晶了,不知是 3-MPA还是OPA?

流动相:A: 40mM磷酸盐缓冲溶液;
B: 乙腈:甲醇:水(45:45:10,V/V/V)。
梯度程序:见表1。
表1 梯度洗脱程序
时间(min)        A(%)        B(%)
0        100        0
1.9        100        0
18.1        43        57
18.6        0        100
22.3        0        100
23.2        100        0
26        100        0
9楼2012-04-10 07:17:35
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padodo

至尊木虫 (职业作家)

胖嘟嘟

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
小彩84(金币+2): O(∩_∩)O谢谢 2011-12-29 21:55:00
看不懂楼主的表述
VWD就是在不同波长下做两次,没有啥波长转换时间,也不需要考虑
从你的图上来看,3-21看338nm的结果,22-24看262nm的结果,即可
我有什么能帮助您的吗?
2楼2011-12-29 08:59:08
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小彩84

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by padodo at 2011-12-29 08:59:08:
看不懂楼主的表述
VWD就是在不同波长下做两次,没有啥波长转换时间,也不需要考虑
从你的图上来看,3-21看338nm的结果,22-24看262nm的结果,即可

VWD检测器的设置里有时间表设置,Xmin之前用Anm,之后用Bnm(见下图)。
我的表述确实有点混乱。上面截得图AAA柱使用说明书上使用DAD检测器测得。我的意思是我用VWD检测器分别在两个波长下扫描图谱,假如得到像上面那样的图谱,通过比较,看到A图第21个峰之后没有比较大的峰了,而B图中相对A图来说21之后有较大峰,这时可否确定红线所对用的时间点为时间表中切换波长的时间点。


3楼2011-12-29 21:54:05
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padodo

至尊木虫 (职业作家)

胖嘟嘟

优秀版主

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小彩84 at 2011-12-29 21:54:05:
VWD检测器的设置里有时间表设置,Xmin之前用Anm,之后用Bnm(见下图)。
我的表述确实有点混乱。上面截得图AAA柱使用说明书上使用DAD检测器测得。我的意思是我用VWD检测器分别在两个波长下扫描图谱,假如得到像 ...

这次看明白了。
应该可以的,但是要求你的柱子的重现性非常好才行,21和22的出峰间隔非常短啊
我有什么能帮助您的吗?
4楼2011-12-30 08:42:07
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