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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 如何确定氨基酸衍生检测VWD检测器的波长转换时间？
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小彩84

新虫 (初入文坛)

[求助] 如何确定氨基酸衍生检测VWD检测器的波长转换时间？

现在作氨基酸检测，用的是OPA-FMOC柱前衍生，用的是Agilent 1100液相系列，标配的是VWD检测器。衍生检测过程中需要在检测器设置了设置时间表进行波长转换（338转到262nm）。本人刚开始作氨基酸，也是用液相的新手，有做过这方面的虫友过来交流一下？
我是不是要先把波长设为338nm，扫一遍谱图，然后把波长设为262nm再扫一遍谱图，两个谱图峰交接的时间点就是波长转换的时间？表达的有点乱，大家看下面的图吧，是不是红色的线对应的时间点？（从AAA柱使用说明书上截的两个图，我自己还没扫呢，拿来打个比方）


[ Last edited by 小彩84 on 2011-12-29 at 07:17 ]
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1楼 2011-12-29 00:49:50
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padodo

至尊木虫 (职业作家)

胖嘟嘟

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
小彩84(金币+2): O(∩_∩)O谢谢 2011-12-29 21:55:00
看不懂楼主的表述
VWD就是在不同波长下做两次，没有啥波长转换时间，也不需要考虑
从你的图上来看，3-21看338nm的结果，22-24看262nm的结果，即可
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我有什么能帮助您的吗？
2楼2011-12-29 08:59:08
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小彩84

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by padodo at 2011-12-29 08:59:08:
看不懂楼主的表述
VWD就是在不同波长下做两次，没有啥波长转换时间，也不需要考虑
从你的图上来看，3-21看338nm的结果，22-24看262nm的结果，即可

VWD检测器的设置里有时间表设置，Xmin之前用Anm，之后用Bnm（见下图）。
我的表述确实有点混乱。上面截得图AAA柱使用说明书上使用DAD检测器测得。我的意思是我用VWD检测器分别在两个波长下扫描图谱，假如得到像上面那样的图谱，通过比较，看到A图第21个峰之后没有比较大的峰了，而B图中相对A图来说21之后有较大峰，这时可否确定红线所对用的时间点为时间表中切换波长的时间点。
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3楼2011-12-29 21:54:05
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padodo

至尊木虫 (职业作家)

胖嘟嘟

优秀版主
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小彩84 at 2011-12-29 21:54:05:
VWD检测器的设置里有时间表设置，Xmin之前用Anm，之后用Bnm（见下图）。
我的表述确实有点混乱。上面截得图AAA柱使用说明书上使用DAD检测器测得。我的意思是我用VWD检测器分别在两个波长下扫描图谱，假如得到像 ...

这次看明白了。
应该可以的，但是要求你的柱子的重现性非常好才行，21和22的出峰间隔非常短啊
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我有什么能帮助您的吗？
4楼2011-12-30 08:42:07
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小彩84

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by padodo at 2011-12-30 08:42:07:
这次看明白了。
应该可以的，但是要求你的柱子的重现性非常好才行，21和22的出峰间隔非常短啊

“应该可以”，你这样做过吗？呵呵，我想得到肯定的答复
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5楼2011-12-31 21:12:05
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padodo

至尊木虫 (职业作家)

胖嘟嘟

优秀版主
你完全可以自己试一次就知道了啊~~又不费事
我没有试过，因此我们的是DAD
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我有什么能帮助您的吗？
6楼2011-12-31 21:53:44
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小彩84

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by padodo at 2011-12-31 21:53:44:
你完全可以自己试一次就知道了啊~~又不费事
我没有试过，因此我们的是DAD

呵呵
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7楼2012-01-01 22:32:06
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Tracy斌

银虫 (初入文坛)
麻烦问下你的衍生剂OPA怎么配的，梯度洗脱怎么分配的。
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没有我干不到的事
8楼2012-03-01 19:57:04
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小彩84

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by Tracy斌 at 2012-03-01 19:57:04:
麻烦问下你的衍生剂OPA怎么配的，梯度洗脱怎么分配的。

10mg/mL OPA试剂：精密称取100mgOPA于10mL的容量瓶中，用1mL无水乙醇溶解后，加入0.1mL 3-MPA，然后用硼酸缓冲液定容并混匀。用0.45μm针头过滤器过滤后，于4℃冰箱中避光分装保存，有效期为一周。
但是放冰箱里发现结晶了，不知是 3-MPA还是OPA？

流动相：A： 40mM磷酸盐缓冲溶液；
B： 乙腈:甲醇:水(45:45:10，V/V/V)。
梯度程序：见表1。
表1 梯度洗脱程序
时间(min)        A(%)        B(%)
0        100        0
1.9        100        0
18.1        43        57
18.6        0        100
22.3        0        100
23.2        100        0
26        100        0
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9楼2012-04-10 07:17:35
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新虫 (初入文坛)
用DVD重现性都不好，何况VWD
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10楼2012-08-18 20:45:55
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