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BIO-che

新虫 (小有名气)

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[求助] 凝胶层析图谱问题

我是做蛋白质纯化的，第一次装柱就跑凝胶，结果有3个气泡，没有发现，跑了一次后，出了2个峰。后来重新装柱，结果发现少了一个峰，原来那个小峰的地方变成一个很小的突起。但是两次上样的量是一样的。
我两次出峰的时间都比较短，大约是走了0.5个柱子体积就出第一个峰，第二个峰大约是0.7-0.8个柱体积就出峰了。
而我的蛋白质条带大约在60KD以下的为主，用的是进口的S-200
各位大侠觉得我是哪里出问题了？
见2，3楼

[ Last edited by 1949stone on 2011-12-18 at 22:04 ]

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1楼2011-12-16 21:18:28

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BIO-che

新虫 (小有名气)

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因为我的电压值很小，别人的大多在100以上我的只有在1以下，所以很麻烦。我用+1至 -1 的范围内做色谱图，结果峰不是很大，但时看不到这个右边的小峰只有到了你看到的这个范围才能看到那个小峰。所以此时的基线变得很不稳。如果+10 至-1的范围基线就很直了！！我唯一想不通的是，柱子中有气泡竞会多出了一个峰，难道有气泡的分辩率会更好？
还有一个更奇怪的，分子筛过完后，纯化倍数下降了，酶与蛋白浓度的比值竞变小了？