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小心点

金虫 (正式写手)

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[求助] HPLC两种物质区分不开的问题，拜托分析高手看下咧~

我是做生物的，对于分析化学方面的问题不大明白。

最近要做个液相，分离对羟基苯氧乙酸（参看后面图）和苯环上加了单羟基的对羟基苯氧丙酸。
我们这里有岛津的液相，C18反向柱，我用了10%~90%的甲醇混水来分，怎么分都只是单峰啊。
请问按照化学方面来说，这两个东西能区分开吗？LC/MS检测这个单峰有这两种产物的分子量啊？
如果区分的话用哪种流动相呢？
高手帮忙，谢谢~

对羟基苯氧丙酸结构式

[ Last edited by 小心点 on 2011-12-15 at 21:57 ]

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1楼2011-12-15 21:36:48

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huazhzh

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★
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小心点(金币+3): 谢谢，这边只有C18柱，你的意思是用0.05%甲酸加10%甲醇最好么？乙酸行么？我看乙酸也有人用的。 2011-12-16 19:04:10
408851978(金币+1): 多多交流 2011-12-17 07:57:10

这两个化合物都是酸性的，又是小分子，在C18上挂不住，很快就下来了，用0.05% 的甲酸，或者0.01% 的三氟乙酸做缓冲液，和高水相溶剂洗脱，比如前面建议的5-10%,或者看柱子要求，5%水相有点低了，直接用10%不变冲上20分钟试试，或者10-30% 梯度洗脱先确定化合物大概什么浓度冲下里。最好用甲醇，乙腈洗脱力强，样品会更挂不住。或者换用C3柱，或者双羟基柱（可用纯水洗脱的）