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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 跪求，超声波破碎真菌细胞壁的条件，在线等。。。。
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jiyannangxj

至尊木虫 (著名写手)

美女搞科研

[求助] 跪求，超声波破碎真菌细胞壁的条件，在线等。。。。

本人做的是天然药物化学，就是从真菌发酵液中提取小分子化合物，包括菌体内和菌体外的化合物，发酵完毕后，想通过超声波破碎的方法破碎真菌细胞壁，不知道需要什么条件，本人不提取胞内酶，只要小分子化合物，所以没必要像网上说的那样，冰浴条件，只想知道 超声频率和超声时间， 实验室没有超声破碎仪，只有个超声波清洗器，工作频率是40KHZ，功率是150W的，不知道可以用来破壁吗？如果可以，超声时间是多少啊？ 各位大侠们，帮忙解答啊，在线等，跪求啊。。。。。
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1楼 2011-12-13 15:42:37
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

happybenny

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-12-13 20:20:53
那个不行，必须用超声破碎仪，不行的话你煮沸后用乙醇破细胞壁，也许可以，我破原核细胞就是这样的。
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2楼2011-12-13 19:57:44
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wjf008

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
jiyannangxj(金币+2): ★有帮助 2012-02-27 01:01:37
破壁的原理一样，如果是写论文的话尽量应该准确一点，清洗仪肯定准确度不高，而且频率范围小。但是话又说回来，很少没经费的实验室因为破壁的问题专门买仪器的。如果是真菌中提取小分子可以考虑萃取和超声并用，注意控制一下超声的时间，实验摸索一下就行，因为细胞不同，细胞壁成分也不一样，即使是同一菌株在培养基成分或者其他培养条件的细胞壁成分也有差别，你只是笼统的说是真菌，破壁条件只能自己实验了。
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4楼2011-12-14 14:30:42
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newtime007

木虫 (正式写手)

成长的微生物

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857(金币+2): guli jiaoliu 2012-02-24 10:41:51
超声破碎的一般条件：功率300w，20分钟。
超声前菌体预处理：菌液离心，用PBS洗涤2-3遍，然后按原菌液体积的1/5-1/10加入裂解液。裂解液成分：50mMTris-HCl，pH8.0.0.2mMEDTA，100mMNaCl，加溶菌酶100ug/ml，0.1%Triton X-100。
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上善若水，水善利万物而不争
7楼2011-12-15 10:09:01
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普通回帖

克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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jiyannangxj(金币+1): ★有帮助 2012-02-27 01:00:31
我们一般用丁酮或者甲醇浸泡下，超声清洗仪里破碎30min。
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3楼2011-12-14 12:12:00
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hlei85

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你先研磨，然后加上有机溶剂超声破碎
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5楼2011-12-14 14:52:07
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
jiyannangxj(金币+1): ★有帮助 2012-02-27 01:01:26
超声清洗仪，不行。
用研钵研磨加提取的有机溶剂。这是最简单的方法了。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
6楼2011-12-15 09:18:35
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Vhongyan

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
jiyannangxj(金币+1): ★有帮助 不过，我自己后几批发酵都在用这种破壁方法，感觉还行，化合物的TLC板子，貌似多了一些，，，，， 2012-02-23 22:55:05
zhang8826857(金币+3): gu li xin chong 2012-02-24 10:42:01
我同门也用超声波清洗仪了，不过距她所说，结果很不理想
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8楼2012-02-21 13:24:33
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jiyannangxj

至尊木虫 (著名写手)

美女搞科研
引用回帖:
楼: Originally posted by happybenny at 2011-12-13 19:57:44:
那个不行，必须用超声破碎仪，不行的话你煮沸后用乙醇破细胞壁，也许可以，我破原核细胞就是这样的。

大哥，我煮沸后，真菌体内的化合物早就破坏了，我还做什么实验啊。。。
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9楼2012-02-24 00:41:32
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jiyannangxj

至尊木虫 (著名写手)

美女搞科研
引用回帖:
楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2011-12-14 12:12:00:
我们一般用丁酮或者甲醇浸泡下，超声清洗仪里破碎30min。

这个可以考虑。。。。我看到的文献用80%丙酮水。
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10楼2012-02-24 00:42:25
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