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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 基因组DNA提取问题
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foreverjohn

金虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 棒哈哈 at 2011-12-14 19:09:14:
谢谢回复！请问加多少RNase合适呢？

10 ug/ml? 不记得了，查分子克隆吧
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21楼2011-12-14 19:37:40
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小小亚杰

木虫 (正式写手)
★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励交流！ 2011-12-15 12:34:48
应该是你的DNA没有完全溶解，你有测量一下你提出来genome的OD值么？
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棒哈哈
22楼2011-12-14 22:04:41
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棒哈哈

铁虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by gene001 at 2011-12-14 19:35:11:
RNA酶使用前最好开水煮一下，尤其是过夜消化用的RNA酶，因为RNA酶里一般会污染有DNA酶！

哦！谢谢
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23楼2011-12-15 12:23:47
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棒哈哈

铁虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by 小小亚杰 at 2011-12-14 22:04:41:
应该是你的DNA没有完全溶解，你有测量一下你提出来genome的OD值么？

我也觉得有可能是没有完全溶解，谢谢了
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24楼2011-12-15 12:24:44
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longrna

新虫 (正式写手)
我从第一张图里看到了DNA。

上样量多，你本身所提的浓度很高就会是现在这种情况（图一）。你稀释到了合适的浓度就是图二。
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伟大航线....
25楼2011-12-15 12:48:31
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longrna

新虫 (正式写手)
某些物种RNA含量丰富，的确需要更强的RNaseA及更长的时间来降解它。

使用RNaseA消化后再使用氯仿抽提纯化一下，可以达到目的。

RNaseA的使用量及孵育时间取决于你的样品以及你所使用的RNaseA活性如何，如你提取RNA含量极少的样品，不加RNaseA提出来的DNA也没有RNA污染。一般37度1-2个钟，期间每隔10-15min稍为混匀即可以降解绝大部分的RNA。
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棒哈哈
伟大航线....
26楼2011-12-15 12:56:42
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小小亚杰

木虫 (正式写手)
引用回帖:
24楼: Originally posted by 棒哈哈 at 2011-12-15 12:24:44:
我也觉得有可能是没有完全溶解，谢谢了

恩，互相学习么
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27楼2011-12-15 17:20:43
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棒哈哈

铁虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by longrna at 2011-12-15 12:56:42:
某些物种RNA含量丰富，的确需要更强的RNaseA及更长的时间来降解它。

使用RNaseA消化后再使用氯仿抽提纯化一下，可以达到目的。

RNaseA的使用量及孵育时间取决于你的样品以及你所使用的RNaseA活性如何，如你 ...

谢谢！又长知识了O(∩_∩)O~
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28楼2011-12-16 13:07:49
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baiyongqin

新虫 (初入文坛)
稀释后你的RNA减少是可以解释的，因为RNA本来就不稳定，它在空气中会慢慢降解的，可是第一个图片中不可能没有DNA的。谢谢！
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29楼2011-12-30 11:29:01
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ma_xiaowen

木虫 (正式写手)
送鲜花一朵
你好，看了你关于真菌基因组的贴子，我发现我最近也遇到了类似的情况，我是用的CTAB法，加后抽提了两次，溶入水或TE都是20uL，再加入1ul的RNase 消解一个小时左右，0.8%的胶检测，就是没有条带出现，反而在RNA条带处出现亮团，而测OD时，核酸浓度也还行，OD260/280  1.8~1.9左右，然后 OD260/230 1.3~1.5 想问问你怎么去解决这个问题，谢谢了啊
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30楼2012-03-02 14:36:02
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