应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 基因组DNA提取问题
332/4返回列表上一页1234下一页
查看: 6916  |  回复: 32
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

棒哈哈

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by xiaohaiyu at 2011-12-14 09:36:45:
DNA溶解后腰放到4度至少两个小时再电泳检测吧

放4度？我都是放37度用RNA酶消化过夜，然后跑电泳的
赞一下 回复此楼
11楼2011-12-14 10:12:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

航航宝贝

银虫 (正式写手)
你好，我建议你用试剂盒提取，以备后期试验用
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

棒哈哈
加油，博友们
12楼2011-12-14 10:35:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yunchemowang

铁虫 (初入文坛)
像上面所说得那样，第一张图下面是RNA，第二张图应该可以用。我提DNA也不用试剂盒，用CTAB法提的，如果不加RNA酶，都是会像第一张图那样下面一大坨，但是上面一般都有带，再跑跑试试，是不是点样量的问题。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

棒哈哈
13楼2011-12-14 10:52:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

棒哈哈

铁虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by yunchemowang at 2011-12-14 10:52:50:
像上面所说得那样，第一张图下面是RNA，第二张图应该可以用。我提DNA也不用试剂盒，用CTAB法提的，如果不加RNA酶，都是会像第一张图那样下面一大坨，但是上面一般都有带，再跑跑试试，是不是点样量的问题。

谢谢!  请问你最后用多少微升的TE溶解DNA？按0.5g菌丝量来说！
赞一下 回复此楼
14楼2011-12-14 13:36:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

coolsc

金虫 (小有名气)
实验出现过楼主的情况，第一张图中是RNA，第二张图中虽然现DNA条带，但貌似也有微弱的RNA在下端出现。建议楼主取样再次检测，有时初提样品肉眼很难判断是否溶解完全，二次检测很有必要。经验所限，希望能有些帮助~
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

棒哈哈
15楼2011-12-14 18:42:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

foreverjohn

金虫 (小有名气)
我提取时刚开始也出现过这样的问题，我觉得（1）尽量不要使用对数生长期的细胞，这时候RNA含量较多。（2）液氮研磨确实能很好地防止降解，个人觉得DNase比较脆弱，并且其活性需要二价阳离子，所以在提取DNA时一般要加入EDTA，因此在加入足量的EDTA（10-50mM）条件下，DNA一般不会降解（个人体会），所以提取过程其实没必要保持很低温度，相反较高的温度可以降解掉RNA，对你的提取有利，但是尽量减少剪切，振荡温和点，枪头剪掉前面部分等。（3）RNase可以在研磨时就加进去，增加消化的时间，沉淀溶解时，不要太浓，体系可以大一点，加入RNase酶消化，效果比较好，消化时可以使用50度，一般半小时以内就可以消化殆尽，这时可以再用酚氯仿再抽提一次，去除蛋白。个人体会，不对之处请指出。
赞一下(2人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

棒哈哈
16楼2011-12-14 18:46:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

棒哈哈

铁虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by 航航宝贝 at 2011-12-14 10:35:20:
你好，我建议你用试剂盒提取，以备后期试验用

谢谢回复
回复此楼
17楼2011-12-14 19:06:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

棒哈哈

铁虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by coolsc at 2011-12-14 18:42:22:
实验出现过楼主的情况，第一张图中是RNA，第二张图中虽然现DNA条带，但貌似也有微弱的RNA在下端出现。建议楼主取样再次检测，有时初提样品肉眼很难判断是否溶解完全，二次检测很有必要。经验所限，希望能有些帮助~

谢谢回复
回复此楼
18楼2011-12-14 19:06:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

棒哈哈

铁虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by foreverjohn at 2011-12-14 18:46:33:
我提取时刚开始也出现过这样的问题，我觉得（1）尽量不要使用对数生长期的细胞，这时候RNA含量较多。（2）液氮研磨确实能很好地防止降解，个人觉得DNase比较脆弱，并且其活性需要二价阳离子，所以在提取DNA时一般 ...

谢谢回复！请问加多少RNase合适呢？
赞一下 回复此楼
19楼2011-12-14 19:09:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gene001

金虫 (正式写手)

就是个普通教师
引用回帖:
8楼: Originally posted by 棒哈哈 at 2011-12-13 19:59:20:
谢谢回复！第二张图的DNA浓度低了，做Southern不行，所以我就是想知道为什么会这样？

RNA酶使用前最好开水煮一下，尤其是过夜消化用的RNA酶，因为RNA酶里一般会污染有DNA酶！
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

棒哈哈
大家共同交流、共同提高！！！
20楼2011-12-14 19:35:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 棒哈哈 的主题更新
332/4返回列表上一页1234下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +46 医学老男孩 2026-08-13 103/5150 2026-08-18 15:33 by dcqxinyang
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +6 yuleib84 2026-08-18 7/350 2026-08-18 15:02 by sytp
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +4 Tide man 2026-08-14 5/250 2026-08-18 11:35 by Tide man
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +5 基诺咪客 2026-08-17 6/300 2026-08-18 11:06 by hunter无悔
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭