| 查看: 5040 | 回复: 32 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
基因组DNA提取问题
|
||
|
大家好，我是做真菌研究的，在提取基因组DNA时遇到一个问题，能力有限，实在是解决不了，可是实验不能等啊，请有经验，有能力的虫友帮我解决一下，谢谢了！！ 我是用液氮研磨菌丝，氯化苄法提取的DNA，提取完之后用200 uL TE buffer溶解（完全溶解）然后用10 uLRNA酶消化过夜，结果跑电泳（见图一），然后我又用TE buffer 稀释5倍后，再跑电泳，结果（见图二），后面加大了RNA酶的量，还是同样出现这种情况，无语了，请问这是为什么？ 我的问题是：DNA用TE 完全溶解后（肉眼观察是完全溶解了的）跑电泳，上面没有目的条带，下面有一团亮带，再用TE稀释5倍后，结果上面出现了很明显的目的条带，下面就基本上没有了，请问这是为什么？？  图一  图二 [ Last edited by 1949stone on 2011-12-14 at 11:33 ] |
回复此楼» 本帖已获得的红花（最新10朵）
ma_xiaowen» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有145人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有3人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
foreverjohn
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1143.2
- 散金: 60
- 红花: 2
- 帖子: 63
- 在线: 169.1小时
- 虫号: 435084
- 注册: 2007-08-19
- 专业: 微生物生理与生物化学
| 我提取时刚开始也出现过这样的问题，我觉得（1）尽量不要使用对数生长期的细胞，这时候RNA含量较多。（2）液氮研磨确实能很好地防止降解，个人觉得DNase比较脆弱，并且其活性需要二价阳离子，所以在提取DNA时一般要加入EDTA，因此在加入足量的EDTA（10-50mM）条件下，DNA一般不会降解（个人体会），所以提取过程其实没必要保持很低温度，相反较高的温度可以降解掉RNA，对你的提取有利，但是尽量减少剪切，振荡温和点，枪头剪掉前面部分等。（3）RNase可以在研磨时就加进去，增加消化的时间，沉淀溶解时，不要太浓，体系可以大一点，加入RNase酶消化，效果比较好，消化时可以使用50度，一般半小时以内就可以消化殆尽，这时可以再用酚氯仿再抽提一次，去除蛋白。个人体会，不对之处请指出。 |
16楼2011-12-14 18:46:33
2楼2011-12-13 16:20:22
4楼2011-12-13 17:40:44
5楼2011-12-13 17:42:19
50