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汕头大学海洋科学接受调剂
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棒哈哈

铁虫 (小有名气)

[求助] 基因组DNA提取问题

大家好,我是做真菌研究的,在提取基因组DNA时遇到一个问题,能力有限,实在是解决不了,可是实验不能等啊,请有经验,有能力的虫友帮我解决一下,谢谢了!!
    我是用液氮研磨菌丝,氯化苄法提取的DNA,提取完之后用200 uL TE buffer溶解(完全溶解)然后用10 uLRNA酶消化过夜,结果跑电泳(见图一),然后我又用TE buffer 稀释5倍后,再跑电泳,结果(见图二),后面加大了RNA酶的量,还是同样出现这种情况,无语了,请问这是为什么?
我的问题是:DNA用TE 完全溶解后(肉眼观察是完全溶解了的)跑电泳,上面没有目的条带,下面有一团亮带,再用TE稀释5倍后,结果上面出现了很明显的目的条带,下面就基本上没有了,请问这是为什么??

图一



图二

[ Last edited by 1949stone on 2011-12-14 at 11:33 ]
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棒哈哈

铁虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
: Originally posted by foreverjohn at 2011-12-14 18:46:33:
我提取时刚开始也出现过这样的问题,我觉得(1)尽量不要使用对数生长期的细胞,这时候RNA含量较多。(2)液氮研磨确实能很好地防止降解,个人觉得DNase比较脆弱,并且其活性需要二价阳离子,所以在提取DNA时一般 ...

谢谢回复!请问加多少RNase合适呢?
19楼2011-12-14 19:09:14
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查看全部 33 个回答

棒哈哈

铁虫 (小有名气)

怎么还是没有消息啊!!!!!!!
2楼2011-12-13 16:20:22
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棒哈哈

铁虫 (小有名气)

西瓜: 回帖置顶 2011-12-13 19:01:04
不好意思, 我表达能力太差了!
我的问题是:DNA用TE 完全溶解后(肉眼观察是完全溶解了的)跑电泳,上面没有目的条带,下面有一团亮带,再用TE稀释5倍后,结果上面出现了很明显的目的条带,下面就基本上没有了,请问这是为什么??
4楼2011-12-13 17:40:44
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棒哈哈

铁虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
: Originally posted by shaoriyan at 2011-12-13 16:47:56:
看不到图片

你好,我补充了问题,图片我这是显示的,不知道为什么,请您再看一次吧,谢谢回复!
5楼2011-12-13 17:42:19
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