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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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wskxbxf

新虫 (小有名气)

[交流] 双酶切 已有1人参与

请大家指点：基因组DNA双酶切之后，为什么跑电泳什么都看不出来呢，上样量是10微升，是因为切完之后浓度太小了吗？还是别的什么原因，在做AFLP，酶切连接之后电泳都没有明显结果，但是做选扩增PCR结果弥散分布在100-1000bp之间，求指点 谢谢各位了
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1楼 2011-12-06 10:45:22
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wskxbxf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-12-06 20:37:25:
当时我们做过不同时间点的酶切，几个小时内可以切开大部分的DNA，但跑胶时在10k以上的大分子量地方仍有堆积，后来延长时间到16-24-30-36都试过，到了24小时已经切完全了，跑出来是十分弥散的带，后来再做时就统一 ...

继续问一个问题啊，呵呵，就是您当时切的24小时，大体系的话也应该有不少蒸发吧，在做时间梯度的时候，是切的一管，然后到一定时间就取出一些供后期的检测还是每个时间段都做了一管呢？
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12楼2011-12-06 21:18:19
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wanhscn(金币+2): 鼓励交流 2011-12-06 14:54:50
基因组DNA双酶切之后，为什么跑电泳什么都看不出来呢?很有可能是楼主的上样量太少！
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jiayoubashaonian
2楼2011-12-06 13:44:14
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wskxbxf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-12-06 13:44:14:
基因组DNA双酶切之后，为什么跑电泳什么都看不出来呢?很有可能是楼主的上样量太少！

谢谢回复 我用的是20微升的双酶切体系 DNA加的300ng左右，点样点了10微升 依您看 该点多少呢  求指导 不胜感激
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3楼2011-12-06 16:12:10
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
amisking(金币+3, MolEPI+1): 鼓励积极应助！ 2011-12-06 20:05:34
楼主，我们当时做Southern blot时验证酶切是否完全是这样来的：DNA 浓度20-25ng/ul，酶切过夜后，取6-8ul加上loading buffer，0.8%胶，100V左右跑电泳验证。
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jiayoubashaonian
4楼2011-12-06 17:11:38
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