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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR条件如何设置？
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gaoxing1989

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR条件如何设置？

各位大虾，本人最近刚涉及PCR技术，有关反应体系中各个成份。。。
买完了PCR的材料，才发现镁离子的浓度和10XBUFFER事先混在一起了，而一般他们俩是分开的放的。我现在只想检测出P出来是否有我要的DNA，请问用多大的体系好？另外，镁离子和缓冲液混合在一起应该怎么办？
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1楼2011-12-01 16:00:06
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

一般预混的buffer中镁离子浓度是PCR酶的最优浓度，绝大多数情况下可以满足实验需要，你先用这个做，电泳一下看有没目的基因。体系20或50微升我觉得不是很重要，除非你用很昂贵的高保真酶预实验中想节省试剂，照着说明书中来就行。
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
4楼2011-12-01 20:37:53
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lren_87

铁杆木虫 (正式写手)

傻子乐

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+11): 处女帖 2011-12-02 12:24:32
你购买的套装应该会有说明书一类的东西的，一般他们都会有推荐体系，会有一个较为详细的说明的。每个公司的推荐体系是不一样的，其次通常也会自己摸索一个适合的体系，所以建议你首先参考你所购买公司的套装的推荐体系做，等有一个认识，熟悉以后可以尝试自己摸索体系。
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大浪淘沙
2楼2011-12-01 19:55:27
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j2

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

预先混合的也会表明镁离子含量，你觉得不够可以补加的
只是看P出来是否是目的基因的话，可以做20ul的体系
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
3楼2011-12-01 20:13:43
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神经再生

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

我的建议是在Kit中的说明书上找到体系各反应成分的终浓度，在生化反应中，谨记重要的是浓度而不是量，说明书上一般是最优化的条件浓度，当然对于不同质量的cDNA或者不同表达量的基因产物是不同的，需要再摸索一下。建议就是先按照说明书终浓度做，结果若不理想再尝试其他浓度。记住是浓度而不是总量哦 ~
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也许似乎大概是，然而未必不见得。
5楼2011-12-02 18:46:48
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