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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 高效液相梯度洗脱问题
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piaoxue1988

木虫 (小有名气)

金虫

[求助] 高效液相梯度洗脱问题

我目前要用岛津LC-10ATVP的高效液相分析一多肽化合物，流动相：乙腈-水，检测波长220nm。但摸条件过程中出现了以下问题：
      （1）等度洗脱时样品峰宽的不行，峰宽达到2min。
      （2）梯度洗脱时基线漂移严重，而且进空样也会出现杂峰（柱子是新的，只做我我的样品，而且我的样品是上过制备HPLC的，比较纯）。
       由于我是第一次用岛津LC-10ATVP高效液相作分析，所以不知道对一个新的化合物如何摸条件才能使它的峰型好一些，基线平一些，梯度应该怎么设置呢？希望大家能够指点指点，再此谢了！！！
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自己的路自己选，自己走
1楼 2011-11-29 18:53:27
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jinemoon

银虫 (正式写手)
加点千分之一的TFA试试，可以有效改善峰形的
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hohohoh
8楼2012-06-11 15:12:02
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水晶虫

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
jiangchunyong(金币+1): 谢谢 2011-11-29 20:05:53
piaoxue1988(金币+3): 2011-11-29 20:22:46
piaoxue1988: 金币+2 2012-04-13 21:44:53
提一点小建议，梯度洗脱是容易出现杂峰，如果等度洗脱只是峰宽的问题，为什么不试一试在次基础上优化一下条件呢，譬如流动相的配比是否合适，流速，或者流动相的pH值，我没有分离过多肽化合物，流动相只能用乙腈和水吗？我不太清楚，可不可以换用浓度小的盐呢！

还有我也走过梯度洗脱，如果梯度合适的话也可以没有杂峰的，不过这得大胆的去尝试喽，虽然条件不太好摸，但是选好了梯度，峰型是不错的！
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2楼2011-11-29 19:37:05
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piaoxue1988

木虫 (小有名气)

金虫
引用回帖:
2楼: Originally posted by 水晶虫 at 2011-11-29 19:37:05:
提一点小建议，梯度洗脱是容易出现杂峰，如果等度洗脱只是峰宽的问题，为什么不试一试在次基础上优化一下条件呢，譬如流动相的配比是否合适，流速，或者流动相的pH值，我没有分离过多肽化合物，流动相只能用乙腈和 ...

我主要看它降解情况，所以最好能用梯度，把降解物都能洗脱下来，流动相不一定是乙腈和水，主要是因为该化合物紫外吸收在低波长处，而且用甲醇水压力太大，所以我选乙腈，流动相的pH我还没考虑，谢谢提醒。
我已经摸了三天的条件了，梯度放缓吧，峰型很差，梯度稍陡些，基线漂移大，而且乙腈比例增加时会出现龟峰。
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自己的路自己选，自己走
3楼2011-11-29 20:31:41
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jixiaw

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
piaoxue1988: 金币+1 2012-04-13 21:45:10
引用回帖:
3楼: Originally posted by piaoxue1988 at 2011-11-29 20:31:41:
我主要看它降解情况，所以最好能用梯度，把降解物都能洗脱下来，流动相不一定是乙腈和水，主要是因为该化合物紫外吸收在低波长处，而且用甲醇水压力太大，所以我选乙腈，流动相的pH我还没考虑，谢谢提醒。
我已 ...

你的检测波长是多少？可不可以换一个检测波长呢？
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4楼2011-12-01 18:00:00
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