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piaoxue1988

木虫 (小有名气)

金虫

[求助] 高效液相梯度洗脱问题

我目前要用岛津LC-10ATVP的高效液相分析一多肽化合物,流动相:乙腈-水,检测波长220nm。但摸条件过程中出现了以下问题:
      (1)等度洗脱时样品峰宽的不行,峰宽达到2min。
      (2)梯度洗脱时基线漂移严重,而且进空样也会出现杂峰(柱子是新的,只做我我的样品,而且我的样品是上过制备HPLC的,比较纯)。
       由于我是第一次用岛津LC-10ATVP高效液相作分析,所以不知道对一个新的化合物如何摸条件才能使它的峰型好一些,基线平一些,梯度应该怎么设置呢?希望大家能够指点指点,再此谢了!!!
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自己的路自己选,自己走
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水晶虫

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
jiangchunyong(金币+1): 谢谢 2011-11-29 20:05:53
piaoxue1988(金币+3): 2011-11-29 20:22:46
piaoxue1988: 金币+2 2012-04-13 21:44:53
提一点小建议,梯度洗脱是容易出现杂峰,如果等度洗脱只是峰宽的问题,为什么不试一试在次基础上优化一下条件呢,譬如流动相的配比是否合适,流速,或者流动相的pH值,我没有分离过多肽化合物,流动相只能用乙腈和水吗?我不太清楚,可不可以换用浓度小的盐呢!

还有我也走过梯度洗脱,如果梯度合适的话也可以没有杂峰的,不过这得大胆的去尝试喽,虽然条件不太好摸,但是选好了梯度,峰型是不错的!
2楼2011-11-29 19:37:05
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piaoxue1988

木虫 (小有名气)

金虫

引用回帖:
2楼: Originally posted by 水晶虫 at 2011-11-29 19:37:05:
提一点小建议,梯度洗脱是容易出现杂峰,如果等度洗脱只是峰宽的问题,为什么不试一试在次基础上优化一下条件呢,譬如流动相的配比是否合适,流速,或者流动相的pH值,我没有分离过多肽化合物,流动相只能用乙腈和 ...

我主要看它降解情况,所以最好能用梯度,把降解物都能洗脱下来,流动相不一定是乙腈和水,主要是因为该化合物紫外吸收在低波长处,而且用甲醇水压力太大,所以我选乙腈,流动相的pH我还没考虑,谢谢提醒。
我已经摸了三天的条件了,梯度放缓吧,峰型很差,梯度稍陡些,基线漂移大,而且乙腈比例增加时会出现龟峰。
自己的路自己选,自己走
3楼2011-11-29 20:31:41
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jixiaw

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


piaoxue1988: 金币+1 2012-04-13 21:45:10
引用回帖:
3楼: Originally posted by piaoxue1988 at 2011-11-29 20:31:41:
我主要看它降解情况,所以最好能用梯度,把降解物都能洗脱下来,流动相不一定是乙腈和水,主要是因为该化合物紫外吸收在低波长处,而且用甲醇水压力太大,所以我选乙腈,流动相的pH我还没考虑,谢谢提醒。
我已 ...

你的检测波长是多少?可不可以换一个检测波长呢?
4楼2011-12-01 18:00:00
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wangfei.ac

铁杆木虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
豆哥: 金币+1, 谢谢参与交流 2012-04-12 09:10:21
piaoxue1988: 金币+4 2012-04-12 22:56:22
piaoxue1988: 金币+3 2012-04-13 21:45:24
乙腈体系一般基线不飘移的;甲醇体系随着比例加大飘移明显,但不影响分析,可空白扣除。至于峰宽,可尝试弱碱性缓冲液看看。
5楼2011-12-01 19:44:32
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
piaoxue1988: 金币+4 2012-04-12 22:56:14
使用碱性缓冲液看看。
蓝精灵
6楼2011-12-01 19:58:27
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tdhy

铁杆木虫 (著名写手)

金薮居士

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
piaoxue1988: 金币+4 2012-04-12 22:56:04
piaoxue1988: 金币+1 2012-04-13 21:45:36
一般先做等度的优化,实在没办法了就用梯度,梯度是液相的噩梦。
哈哈哈
7楼2012-04-11 16:58:16
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jinemoon

银虫 (正式写手)

加点千分之一的TFA试试,可以有效改善峰形的
hohohoh
8楼2012-06-11 15:12:02
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leecius

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
piaoxue1988: 金币+21 2012-06-11 22:56:46
同意楼上的,应该加点三氟乙酸试试,多肽常用的添加剂。
心似白云常自在,意如流水任东西。
9楼2012-06-11 16:24:06
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