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243562850

新虫 (初入文坛)

[交流] 去动物组织时如何防止RNA的降解 已有4人参与

我现在有的小鼠的子宫已经放在-80度的冰箱里了,如果拿出来分离内膜的话如何防止RNA的降解呢?用的器械枪头需要什么特殊处理呢?有人说把子宫拿出来再分离内膜RNA就降解的很厉害了所以不够后续的做基因芯片用的了,所以就建议我重新取新鲜组织保存在RNAlater里再运送到公司做基因芯片,麻烦问一下取出来的新鲜标本可以直接放在Trizol里然后再运到外地的公司吗?本人没有什么经验,望高人指导一下,谢谢!

[ 来自科研家族 快乐检索 ]
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
直接取新鲜组织-80度冻存然后干冰运输去公司应该没问题的
青春的岁月,我们身不由己,只因这胸中燃烧的梦想!
2楼2011-11-29 15:23:53
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243562850

新虫 (初入文坛)


jhu132llh(金币+1): good,鼓励新虫积极参加讨论 2011-12-01 17:45:49
取组织用的器械要不要特殊处理呢?我的标本现在在-80的冰箱里,如果拿出来取内膜的话会不会有RNA的降解呢?
3楼2011-11-29 21:01:36
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cindy1890

铜虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
jhu132llh(金币+1): good,鼓励积极应助 2011-12-01 17:45:54
枪头高温灭活RNA酶就好了。注意RNA酶,能够高压蒸汽灭活的都灭活下,效果还不错,祝成功
4楼2011-11-29 22:09:08
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cindy1890

铜虫 (小有名气)

降解是肯定有的,但是应该不会太多,反转录的话还是没问题的
5楼2011-11-29 22:10:38
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wiln1

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
jhu132llh(金币+3, APEPI+1): good,鼓励积极应助 2011-12-01 17:46:13
1.经常更换新手套。
2.塑料制品和枪头使用前要用0.1%DEPC水浸泡过夜,后灭菌。玻璃及铁制器皿要在200℃烘箱干烘6-8h。
3.配制溶液应使用无Rnase的水(将水加入干净的试剂瓶中,加DEPC至终浓度0.1%,放置过夜,高压灭菌)。
4.实验前要将超净台台面及移液器用75%酒精棉擦拭灭菌。实验过程中尽量使用无菌镊子操作,尽量避免用手接触
5. 最好用鲜样,冻的样拿出来分离过程中会解冻,这个过程RNA很容易降解。
6. 我觉得你最好自己提取RNA,我不知道动物怎么样,反正我以前送过植物样去公司做,他们提取的效果跟我们自己提取的效果差远了。因为他们不是针对某一种特定材料,而是用通用方法。如果该材料不容易提,我建议还是自己提取。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

6楼2011-11-30 07:48:15
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微积分2006

木虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by wiln1 at 2011-11-30 07:48:15:
1.经常更换新手套。
2.塑料制品和枪头使用前要用0.1%DEPC水浸泡过夜,后灭菌。玻璃及铁制器皿要在200℃烘箱干烘6-8h。
3.配制溶液应使用无Rnase的水(将水加入干净的试剂瓶中,加DEPC至终浓度0.1%,放置过夜 ...

学习了
身未动,心已远
7楼2011-11-30 08:21:38
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243562850

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by cindy1890 at 2011-11-29 22:09:08:
枪头高温灭活RNA酶就好了。注意RNA酶,能够高压蒸汽灭活的都灭活下,效果还不错,祝成功

谢谢!
8楼2011-11-30 10:22:39
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243562850

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by wiln1 at 2011-11-30 07:48:15:
1.经常更换新手套。
2.塑料制品和枪头使用前要用0.1%DEPC水浸泡过夜,后灭菌。玻璃及铁制器皿要在200℃烘箱干烘6-8h。
3.配制溶液应使用无Rnase的水(将水加入干净的试剂瓶中,加DEPC至终浓度0.1%,放置过夜 ...

非常感谢您的建议
9楼2011-11-30 10:25:07
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