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菠萝蜜123

新虫 (小有名气)

[求助] 关于分光光度计测蛋白的问题 求助于大家

有几个问题想请教大家
我制备的昆虫血淋巴粗提液,没有加PMSF和苯基硫脲,用分光光度计测蛋白浓度,刚提完时测的是0.357,然后就把剩下的粗提液放在了4度冰箱里,过了几天再测(方法一样),吸光值变成了0.442,也就是里面蛋白增多了?这是怎么回事呢,是不是要放在-20°才可以?
还有一个  大家都说血缓要加PMSF和苯基硫脲,我买来的都是晶体,我直接往离心管里加然后再加血缓,可是,晶体还是晶体,根本不溶解啊,这样,PMSF和苯基硫脲能起到作用吗?
谢谢大家帮忙解答一下!
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菠萝蜜123

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by brightfuture01 at 2011-11-25 22:29:34:
我不太清楚你的组织破碎方法,要花很长时间么?
如果非要冻存的话就放液氮里面,至少放在-80.
不过为何不弄完一个就加loading buffer煮沸变性呢?然后完了一起跑电泳,这样也不怕降解了。

嗯  是个办法!但是煮沸完以后 过几天再跑不会对结果有什么影响吗?
9楼2011-11-26 22:09:02
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

【答案】应助回帖

★ ★ ★
菠萝蜜123(金币+9): 2011-11-25 21:23:25
wanhscn(金币+3, MolEPI+1): Good!热心!专业! 2011-11-25 21:33:26
兄弟你用药品从来不看是水溶性的还是溶于有机溶剂的么?

PMSF要溶于乙醇异丙醇等有机溶剂。

你的那个组织中会有蛋白酶不?裂解完后蛋白酶把你的蛋白全降解了。

试验都不提前设计的么?
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-11-25 18:00:13
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青豆同学

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励交流 2011-11-25 21:32:51
楼上说的很对,再就是,PMSF起作用也就是短时间的(我这里是用甲醇来溶的),几小时吧,毒性很大,通风橱里操作。还有就是,会不会是你样品不均匀呢?导致你测定误差?
谢谢你给我信心与力量,我会努力!
3楼2011-11-25 21:05:09
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菠萝蜜123

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by brightfuture01 at 2011-11-25 18:00:13:
兄弟你用药品从来不看是水溶性的还是溶于有机溶剂的么?

PMSF要溶于乙醇异丙醇等有机溶剂。

你的那个组织中会有蛋白酶不?裂解完后蛋白酶把你的蛋白全降解了。

试验都不提前设计的么?

嗯  是的  这一块之前我就感觉非常模糊  首先我有个问题要请教  降解带来的后果是什么,后面我是用蛋白的粗提液来做SDS-PAGE,降解与否会带来不一样的结果吗?其次,我提的幼虫的血淋巴非常少,然后把它溶在缓冲液里,稀释的倍数是一定的,这样,问题来了,那我加入的带有PMSF的乙醇算不算稀释液呢?第三,PMSF那么快就降解完了,我要不停的加吗,因为试验关系,要保留一段时间才能做电泳。但是一直加也不现实啊!
谢谢解答
4楼2011-11-25 21:35:32
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