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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于分光光度计测蛋白的问题 求助于大家
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菠萝蜜123

新虫 (小有名气)

[求助] 关于分光光度计测蛋白的问题 求助于大家

有几个问题想请教大家
我制备的昆虫血淋巴粗提液，没有加PMSF和苯基硫脲，用分光光度计测蛋白浓度，刚提完时测的是0.357，然后就把剩下的粗提液放在了4度冰箱里，过了几天再测（方法一样），吸光值变成了0.442，也就是里面蛋白增多了？这是怎么回事呢，是不是要放在-20°才可以？
还有一个  大家都说血缓要加PMSF和苯基硫脲，我买来的都是晶体，我直接往离心管里加然后再加血缓，可是，晶体还是晶体，根本不溶解啊，这样，PMSF和苯基硫脲能起到作用吗？
谢谢大家帮忙解答一下！
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1楼 2011-11-24 23:04:32
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菠萝蜜123

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by brightfuture01 at 2011-11-25 22:29:34:
我不太清楚你的组织破碎方法，要花很长时间么？
如果非要冻存的话就放液氮里面，至少放在-80.
不过为何不弄完一个就加loading buffer煮沸变性呢？然后完了一起跑电泳，这样也不怕降解了。

嗯  是个办法！但是煮沸完以后 过几天再跑不会对结果有什么影响吗？
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9楼2011-11-26 22:09:02
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

【答案】应助回帖

★ ★ ★
菠萝蜜123(金币+9): 2011-11-25 21:23:25
wanhscn(金币+3, MolEPI+1): Good！热心！专业！ 2011-11-25 21:33:26
兄弟你用药品从来不看是水溶性的还是溶于有机溶剂的么？

PMSF要溶于乙醇异丙醇等有机溶剂。

你的那个组织中会有蛋白酶不？裂解完后蛋白酶把你的蛋白全降解了。

试验都不提前设计的么？
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-11-25 18:00:13
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青豆同学

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励交流 2011-11-25 21:32:51
楼上说的很对，再就是，PMSF起作用也就是短时间的（我这里是用甲醇来溶的），几小时吧，毒性很大，通风橱里操作。还有就是，会不会是你样品不均匀呢？导致你测定误差？
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谢谢你给我信心与力量，我会努力！
3楼2011-11-25 21:05:09
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菠萝蜜123

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by brightfuture01 at 2011-11-25 18:00:13:
兄弟你用药品从来不看是水溶性的还是溶于有机溶剂的么？

PMSF要溶于乙醇异丙醇等有机溶剂。

你的那个组织中会有蛋白酶不？裂解完后蛋白酶把你的蛋白全降解了。

试验都不提前设计的么？

嗯  是的  这一块之前我就感觉非常模糊  首先我有个问题要请教  降解带来的后果是什么，后面我是用蛋白的粗提液来做SDS-PAGE，降解与否会带来不一样的结果吗？其次，我提的幼虫的血淋巴非常少，然后把它溶在缓冲液里，稀释的倍数是一定的，这样，问题来了，那我加入的带有PMSF的乙醇算不算稀释液呢？第三，PMSF那么快就降解完了，我要不停的加吗，因为试验关系，要保留一段时间才能做电泳。但是一直加也不现实啊！
谢谢解答
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4楼2011-11-25 21:35:32
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