应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于分光光度计测蛋白的问题 求助于大家
71/1返回列表
查看: 1951  |  回复: 14
查看全部回帖 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

菠萝蜜123

新虫 (小有名气)

[求助] 关于分光光度计测蛋白的问题 求助于大家

有几个问题想请教大家
我制备的昆虫血淋巴粗提液，没有加PMSF和苯基硫脲，用分光光度计测蛋白浓度，刚提完时测的是0.357，然后就把剩下的粗提液放在了4度冰箱里，过了几天再测（方法一样），吸光值变成了0.442，也就是里面蛋白增多了？这是怎么回事呢，是不是要放在-20°才可以？
还有一个  大家都说血缓要加PMSF和苯基硫脲，我买来的都是晶体，我直接往离心管里加然后再加血缓，可是，晶体还是晶体，根本不溶解啊，这样，PMSF和苯基硫脲能起到作用吗？
谢谢大家帮忙解答一下！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

王世玉

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-11-24 23:04:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

【答案】应助回帖

★ ★ ★
菠萝蜜123(金币+9): 2011-11-25 21:23:25
wanhscn(金币+3, MolEPI+1): Good！热心！专业！ 2011-11-25 21:33:26
兄弟你用药品从来不看是水溶性的还是溶于有机溶剂的么？

PMSF要溶于乙醇异丙醇等有机溶剂。

你的那个组织中会有蛋白酶不？裂解完后蛋白酶把你的蛋白全降解了。

试验都不提前设计的么？
赞一下(1人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-11-25 18:00:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5): Good！连楼下一贴一起授予EPI！ 2011-11-28 10:54:25
引用回帖:
4楼: Originally posted by 菠萝蜜123 at 2011-11-25 21:35:32:
嗯  是的  这一块之前我就感觉非常模糊  首先我有个问题要请教  降解带来的后果是什么，后面我是用蛋白的粗提液来做SDS-PAGE，降解与否会带来不一样的结果吗？其次，我提的幼虫的血淋巴非常少，然后把它溶在缓冲 ...

你做SDS-PAGE的目的是什么？无非是想正确反映你组织里面蛋白的组成或者定位某蛋白的大小等原因，你的蛋白都降解了，那你跑这个电泳还有什么意义？PMSF是配成100mM的贮液，使用时的终浓度是1mM，所以体积应该也占不了多少，对实验没有什么明显影响。

PMSF在水中的半衰期是半个小时左右。为啥不是破完组织，测完浓度马上跑电泳呢？这些实验一上午都用不了应该就能就轻松做完了的。跑电泳的那点点样品应该还是有的吧？20ul 就足够了...
赞一下(2人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
6楼2011-11-25 21:52:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 辛苦！ 2011-11-28 10:52:45
我不太清楚你的组织破碎方法，要花很长时间么？
如果非要冻存的话就放液氮里面，至少放在-80.
不过为何不弄完一个就加loading buffer煮沸变性呢？然后完了一起跑电泳，这样也不怕降解了。
赞一下(1人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
8楼2011-11-25 22:29:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
wanhscn(金币+1): 顶这句话！ 2011-11-27 16:07:35
引用回帖:
9楼: Originally posted by 菠萝蜜123 at 2011-11-26 22:09:02:
嗯  是个办法！但是煮沸完以后 过几天再跑不会对结果有什么影响吗？

无语了，为什么要过几天呢？如果你的样品很珍贵很少的话，不睡觉都得做完。
赞一下(1人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
10楼2011-11-26 22:38:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★
wanhscn(金币+1): Good！ 2011-11-27 16:08:13
西瓜(金币+1): Good 2011-11-28 10:53:15
引用回帖:
11楼: Originally posted by 菠萝蜜123 at 2011-11-27 12:56:47:
哦    是这样  我的问题就在于样品不是同一时间获得啊， 比如我今天取个样，明天后天我要依次取样，要等所有的样品都有了，才能电泳，我想请教一下，这种情况下，如何保存蛋白比较好呢？

那你先将组织冻存起来，收集完全后集中一天时间破碎跑电泳。
赞一下(2人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
12楼2011-11-27 15:09:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
西瓜(金币+1): 热心的专家！ 2011-11-28 10:53:27
引用回帖:
13楼: Originally posted by 菠萝蜜123 at 2011-11-28 09:49:53:
嗯  ，你说的破碎就是指 从 -80° 拿出来后直接放到沸水去煮是么

动物细胞比细菌好破多了，不过最好还是稍微超声一下。
赞一下(1人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
14楼2011-11-28 10:26:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 菠萝蜜123 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭