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菠萝蜜123

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[求助] 关于分光光度计测蛋白的问题求助于大家

有几个问题想请教大家
我制备的昆虫血淋巴粗提液，没有加PMSF和苯基硫脲，用分光光度计测蛋白浓度，刚提完时测的是0.357，然后就把剩下的粗提液放在了4度冰箱里，过了几天再测（方法一样），吸光值变成了0.442，也就是里面蛋白增多了？这是怎么回事呢，是不是要放在-20°才可以？
还有一个大家都说血缓要加PMSF和苯基硫脲，我买来的都是晶体，我直接往离心管里加然后再加血缓，可是，晶体还是晶体，根本不溶解啊，这样，PMSF和苯基硫脲能起到作用吗？
谢谢大家帮忙解答一下！

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1楼 2011-11-24 23:04:32

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菠萝蜜123

新虫 (小有名气)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by brightfuture01 at 2011-11-25 18:00:13:

兄弟你用药品从来不看是水溶性的还是溶于有机溶剂的么？

PMSF要溶于乙醇异丙醇等有机溶剂。

你的那个组织中会有蛋白酶不？裂解完后蛋白酶把你的蛋白全降解了。

试验都不提前设计的么？

嗯是的这一块之前我就感觉非常模糊首先我有个问题要请教降解带来的后果是什么，后面我是用蛋白的粗提液来做SDS-PAGE，降解与否会带来不一样的结果吗？其次，我提的幼虫的血淋巴非常少，然后把它溶在缓冲液里，稀释的倍数是一定的，这样，问题来了，那我加入的带有PMSF的乙醇算不算稀释液呢？第三，PMSF那么快就降解完了，我要不停的加吗，因为试验关系，要保留一段时间才能做电泳。但是一直加也不现实啊！
谢谢解答