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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 帮人代做克隆有可行性吗？
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fushxmy

金虫 (正式写手)

[交流] 帮人代做克隆有可行性吗？ 已有16人参与

本人从事分子生物学多年，对克隆无论是单片段多片段，点突变构建应该算是小有心得，现在无论什么克隆100%成功，从设计引物到完成，无论多少片段一周完成，不知道能否以此技术赚点小钱，谢谢提建议！
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秦皇汉武
1楼 2011-11-22 11:42:15
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huiee

金虫 (正式写手)
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>20kb的质粒上 如何点突变？ 一周之内能做完？
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16楼2011-11-23 00:13:16
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huiee

金虫 (正式写手)
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引用回帖:
18楼: Originally posted by fushxmy at 2011-11-23 02:05:25:
找到最短的地方把需要突变的地方切开，通过overlap pcr操作。如果找不到酶切位点，分段pcr连接上。一周绝对完成，我的多复杂的克隆没超过一周的。

如何保证其他地方没有突变 如果都用PCR的话
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19楼2011-11-23 03:13:59
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huiee

金虫 (正式写手)
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引用回帖:
20楼: Originally posted by fushxmy at 2011-11-23 03:53:01:
取决于你的Polymerase还有引物的质量，根据我的经验突变一般会发生在引物序列上，找一家质量可靠的引物公司很重要。

等你做个高GC的就知道啦，2kb用Phusion做PCR都有2个突变
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22楼2011-11-23 16:12:44
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