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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 帮人代做克隆有可行性吗？
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fushxmy

金虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 547star at 2011-11-22 14:22:42:
当天就完成合成！多大片段?如果需要PCR的，怕是只完成了PCR吧？

合成基因不能太大，1•5kb以下1kb最合适，否则分段完成，参见我的克隆方法连接完成。现在快速的酶2kb每分钟。
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秦皇汉武
11楼2011-11-22 14:26:05
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0624410024

金虫 (正式写手)

Begging for knowledge
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
楼主如果只是帮克隆的话就没啥子前途，你可以弄个公司专门从事生物技术服务！~
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每天坚持多一点，以后困难少一点！
12楼2011-11-22 15:13:39
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我是李凯

木虫 (著名写手)
理论上没问题
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13楼2011-11-22 15:57:51
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
楼主开个公司吧，哈哈哈
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14楼2011-11-22 17:43:31
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fushxmy

金虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-11-22 17:43:31:
楼主开个公司吧，哈哈哈

等我找到学校的工作，可以兼职干干，谢谢建议！
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秦皇汉武
15楼2011-11-22 23:20:50
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huiee

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
>20kb的质粒上 如何点突变？ 一周之内能做完？
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16楼2011-11-23 00:13:16
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kanglingle

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
合成基因多快？人家公司预留时间是包含修正突变的。
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17楼2011-11-23 01:35:46
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fushxmy

金虫 (正式写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by huiee at 2011-11-23 00:13:16:
>20kb的质粒上 如何点突变？ 一周之内能做完？

找到最短的地方把需要突变的地方切开，通过overlap pcr操作。如果找不到酶切位点，分段pcr连接上。一周绝对完成，我的多复杂的克隆没超过一周的。
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秦皇汉武
18楼2011-11-23 02:05:25
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huiee

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
18楼: Originally posted by fushxmy at 2011-11-23 02:05:25:
找到最短的地方把需要突变的地方切开，通过overlap pcr操作。如果找不到酶切位点，分段pcr连接上。一周绝对完成，我的多复杂的克隆没超过一周的。

如何保证其他地方没有突变 如果都用PCR的话
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19楼2011-11-23 03:13:59
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fushxmy

金虫 (正式写手)
引用回帖:
19楼: Originally posted by huiee at 2011-11-23 03:13:59:
如何保证其他地方没有突变 如果都用PCR的话

取决于你的Polymerase还有引物的质量，根据我的经验突变一般会发生在引物序列上，找一家质量可靠的引物公司很重要。
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秦皇汉武
20楼2011-11-23 03:53:01
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