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bassk

木虫 (小有名气)

[求助] 齐墩果酸与人参皂苷类如何用一个HPLC条件走出

齐墩果酸五环三萜类极性很小,人参皂苷类极性较大,但是两者都同属三萜类,都是末端吸收203~210nm,按道理说可以采用紫外检测器同时检测。这几天走了几个梯度条件都不理想,我的思路是这样的:先采用中国药典2010版人参项下条件走60min(主要是乙腈-水,水比例较高80~45),然后梯度增加乙腈的比例,走至100min,但是齐墩果酸还是走不出来,请教各位能不能把保留时间限定在100min内,把上述两类成分分离呢?
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wangfei.ac

铁杆木虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

★ ★
qinhy(金币+2): 鼓励新虫~ 2011-11-23 20:18:44
bassk(金币+20): 很有帮助 2011-11-26 10:14:13
前提是要保证紫外能够检测到;建议可用100%乙腈试冲,看看在何时出峰,在此基础上再做条件优化。不妨一试
2楼2011-11-23 12:17:34
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bassk

木虫 (小有名气)

昨天用乙腈-0.05M乙酸铵等度跑齐墩果酸,峰形各方面都可以,接着参考药典三七,把水换成乙酸铵,梯度跑人参皂苷和齐墩果酸混标,结果基线出现负值,呈现出梯度的曲线,不知道各位有何高见?
3楼2011-11-26 10:25:32
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wangfei.ac

铁杆木虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

药典条件不一定是最优的,只要是人定的规矩都有被进一步完善的空间。
关于分析条件的摸索,最适合的(良好的分离度+快速的分析时间)才是最好的。
4楼2011-11-26 12:13:03
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ai532521720

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

bassk(金币+10): 现在正在尝试您提供的方法,先跑齐墩果酸,再加大水的比例 2011-11-27 13:54:38
我也觉得药典不是最好的,我觉得可以先将乙腈的的比例调高,将人参皂苷的出峰时间降低
5楼2011-11-26 19:04:02
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匿名

用户注销 (文坛精英)


bassk(金币+10): 尝试过了,加大乙腈比例后能跑出来,但是齐墩果酸跟熊果酸峰分不开,而且梯度变化太大,要走很长,基线才不会负值 2011-11-27 13:53:20
本帖仅楼主可见
6楼2011-11-27 06:57:15
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chlh

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


bassk(金币+10): 谢谢您的回帖,我昨天摸了条件跟你的差不多,样品中齐墩果酸、熊果酸都有,两者分不开来,请问如何解决呢? 2011-11-28 20:40:03
qinhy(金币+1): 多谢回帖~ 2011-11-29 20:20:58
流动相为:水(A)/乙腈(B)梯度洗脱,梯度洗脱条件为0~8 min:A,80 %,B,20 %;8~20 min:A,65 %,B,35 %;20~35 min:A,30 %,B,70 %;35~40 min:A,30 %,B,70 %;40~50 min:B,100 %;50~60 min:B,100 %;60~70 min:A,80 %,B,20 %。
这是我实验室用的,我们也在做人参皂苷项目,应该没问题,能满足的要求,我们以前思路跟你一样,摸出来的!
7楼2011-11-28 11:02:17
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bassk

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by trywpl at 2011-11-27 06:57:15:
采用梯度,当人参皂苷出来后,加大乙腈的比例

具体条件跟色谱图如下,60min前分出三个皂苷峰,110分钟左右齐墩果酸熊果酸分不开。

HPLC条件



色谱图

8楼2011-11-28 20:42:05
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chlh

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你在40-100min梯度变化太慢,峰都后移了,浓度梯度提前!
9楼2011-11-29 08:38:33
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wangfei.ac

铁杆木虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

色谱条件还有很大的优化空间,从35分钟开始就可显著加大乙腈比例,不然太费时了,乙腈可是很贵的
10楼2011-11-29 08:50:48
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